含小分子激酶抑制劑的抗腫瘤鉑(Ⅳ)前藥研究.pdf

1、本文將順鉑與CK2的小分子ATP競爭性激酶抑制劑CX-4945(Silmitasertib)相結合設計合成了一類新型鉑(IV)前藥，相關化合物通過核磁氫譜、碳譜和高分辨質譜進行了結構表征。
　　以代表性化合物Cx-platin為對象開展了深入的化學與生物實驗，研究了其抗腫瘤性質，并探討了相關作用機制，主要內(nèi)容有:
　　高效液相色譜分析說明Cx-platin在抗壞血酸還原下，軸向基團脫落形成順鉑和CX-4945。穩(wěn)定性研究表明

2、正常條件下Cx-platin在24 h內(nèi)沒有發(fā)生變化，具有較好的穩(wěn)定性。
　　體外抗腫瘤活性研究表明Cx-platin對CK2過表達癌細胞具有高效的抑制活性，相同濃度條件下抑制率是順鉑的2-3倍，且對順鉑耐藥細胞敏感。人胃癌細胞(SGC-7901)和人胃癌順鉑耐藥細胞(SGC-7901/cDDP)對化合物的攝取量是順鉑的3-4倍?；诟咚降你K攝取量，Cx-platin表現(xiàn)出比順鉑更優(yōu)的誘導細胞凋亡的能力。
　　CK2酶抑制

3、活性檢測結果表明，Cx-platin和CK2強效抑制劑CX-4945具有同等水平的抑制活性。單細胞凝膠電泳實驗結果表明Cx-platin能夠引起癌細胞DNA鏈解旋并且出現(xiàn)斷鏈損傷。Western Blot分析說明用Cx-platin處理SGC-7901細胞和SGC-7901/cDDP耐藥細胞后，細胞內(nèi)P-CHK1(S345)和P-CHK2(T68)的表達被激活，同時Cx-platin下調(diào)了CHK1和CHK2的表達水平，特別是在SGC-7

4、901/cDDP細胞內(nèi)。由此可以得出，細胞DNA損傷修復得到抑制，并且Cx-platin能夠引起細胞DNA的雙鏈斷裂。
　　熒光共聚焦顯微鏡圖顯示經(jīng)過Cx-platin處理過后的癌細胞內(nèi)，γH2AX的綠色熒光焦點密集分布。同時p-XRCC1以及MDC1的熒光強度相較于對照組有明顯的減弱。而順鉑只能稍微引起γH2AX的熒光焦點，且p-XRCC1的熒光強度相較于對照組有大幅度增加。這說明經(jīng)過Cx-platin處理過后的癌細胞DNA發(fā)生

5、單鏈斷裂和雙鏈斷裂，且Cx-platin能夠抑制DNA斷鏈修復。而順鉑主要引起癌細胞DNA發(fā)生單鏈斷裂，并且不具備抑制作用。
　　體內(nèi)實驗結果表明在給藥次數(shù)最少的情況下（3次），Cx-platin能夠有效抑制腫瘤生長，與順鉑、CX-4945及其兩者等摩爾混合物相比具有最優(yōu)的抗腫瘤活性。動物實驗前后體重顯示給藥前后小鼠體重相對初始體重略有增加，組織學分析表明Cx-platin沒有引起正常細胞的形態(tài)學變化，說明Cx-platin對正常