靶向ECFR-PIK3CA的小分子抑制劑在食管鱗癌中抗腫瘤活性的基礎研究.pdf

1、食管癌是我國常見的的惡性腫瘤之一，其中食管鱗狀細胞癌是主要類型，患者整體五年生存率不足20％。食管癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在大量分子異常改變，包括TP53、PIK3CA、CDKN2A、RB1、NOTCH1等多個高頻突變基因。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)EGFR高水平擴增同時其蛋白高表達基因，功能研究結(jié)果提示，EGFR和PIK3CA有望作為食管鱗癌的治療靶點。
　　方法：
　　本課題根據(jù)研究小組前期工作，針對EGFR和PIK3CA進行靶向小

2、分子抑制劑篩選。首先利用免疫組織化學方法驗證EGFR在食管鱗癌組織中的表達情況，然后通過Westen Blot檢測實驗室食管鱗癌細胞系中EGFR的表達情況。其次通過MTT法考察Erlotinb、Afatinib對食管鱗癌細胞系的影響;通過CCK-8法體外檢測Erlotinib、Afatinib、Alpelisib對食管鱗癌細胞系的IC50值，考察藥物敏感性。進一步通過裸鼠皮下抑瘤實驗考察Erlotinib在體內(nèi)的抗腫瘤活性。最后通過We

3、stern Blot檢測藥物處理后信號通路分子的變化。
　　結(jié)果：
　　與課題組前期工作和國內(nèi)外研究現(xiàn)狀一致，對于食管鱗癌組織的免疫組織化學方法驗證了EGFR在食管鱗癌組織中的高表達。Western Blot結(jié)果顯示EGFR在食管鱗癌細胞系KYSE150、KYSE180、KYSE450中高表達。MTT法考察發(fā)現(xiàn)Erlotinib、Afatinib對食管鱗癌細胞系的增殖能力有抑制作用。CCK-8法檢測出Erlotinib、Af

4、atinib以及Alpelisib對食管鱗癌細胞系KYSE150、KYSE180、KYSE450、KYSE510的IC50值，發(fā)現(xiàn)KYSE450對Erlotinib、Afatinib敏感，其余三種細胞系對Alpelisib敏感。裸鼠皮下瘤生長抑制實驗表明Erlotinib可以延緩KYSE450在小鼠體內(nèi)的腫瘤生長速度，但結(jié)局與對照組無統(tǒng)計學差異。Western-Blot提示Erlotinib處理后KYSE450細胞系中p-ERK下調(diào)，而

5、p-AKT上調(diào);Afatinib處理后KYSE450細胞系中p-ERK下調(diào)，而p-AKT無明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.KYSE450對Erlotinib和Afatinib敏感，對Alpelisib不敏感;KYSES10、KYSE150、KYSE180對Alpelisib敏感，對Erlotinib和Afatinib不敏感。
　　2.表明Erlotinib影響KYSE450細胞系腫瘤生長速度，但終點與對照組無顯著差異。