APE1小分子抑制劑的篩選鑒定及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、APE1是一種多功能蛋白酶,具有DNA堿基切除修復(fù)、氧化還原生物等功能,是大分子功能復(fù)合體的一個范例。它在 DNA損傷修復(fù)和氧化還原信號調(diào)控等多個重要的生物學(xué)過程中發(fā)揮著主要作用。APE1在大多數(shù)惡性腫瘤中高表達或胞漿異位表達,被認為是惡性腫瘤的重要標志物。抑制APE1可顯著殺傷腫瘤細胞,同時極大地提高細胞對DNA損傷的敏感性。因此,APE1極有可能是增強腫瘤細胞對化療敏感性的有效作用靶點。最新研究發(fā)現(xiàn),APE1氧化還原抑制劑可以被用作

2、一個藥物單獨使用,也可作為一種具有潛在抗增殖或細胞毒性藥物與現(xiàn)有治療手段聯(lián)合使用,具有重要的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用價值。已發(fā)現(xiàn)大量的APE1小分子抑制劑,但這些化合物的研究都處于初級階段。本研究通過對中藥天然小分子化合物庫進行虛擬篩選并結(jié)合體外活性篩選,以其獲得APE1特異的小分子抑制劑,為以APE1為靶點的分子靶向治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　目的:
　　篩選鑒定APE1的特異性小分子抑制劑,并研究其抗腫瘤活性。
　　方法:

3、　　1.基于APE1蛋白結(jié)構(gòu),運用計算機虛擬篩選從中藥天然小分子化合物庫中發(fā)掘APE1的候選小分子抑制劑;
　　2.通過電泳遷移率實驗對98種小分子化合物分子進行活性篩選及鑒定;
　　3.AP內(nèi)切酶實驗鑒定候選化合物對APE1損傷修復(fù)的抑制作用;
　　4.雙偏振極化干涉分析系統(tǒng)檢測APE1與候選抑制劑的相互作用;
　　5.CCK-8、荷瘤裸鼠實驗研究棉酚抗腫瘤及協(xié)同順鉑化療作用。
　　結(jié)果:
　　1.

4、通過虛擬篩選,發(fā)現(xiàn)61個對APE1功能具有潛在抑制活性的小分子化和物,其中5個針對APE1的損傷修復(fù)功能,56個針對氧化還原功能。
　　2.通過電泳遷移率實驗、AP內(nèi)切酶實驗、雙偏振極化干涉分析,發(fā)現(xiàn)丹參酮ⅡA、棉酚、依布硒通過與 APE1直接相互作用顯著抑制其氧化還原功能,其中棉酚還可顯著抑制APE1修復(fù)功能。
　　3.體內(nèi)外實驗表明棉酚可顯著抑制宮頸癌腫瘤生長并可增強順鉑化療敏感性。
　　結(jié)論:
　　1.丹參