H2S對脂多糖誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的拮抗作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：探討H2S對脂多糖（LPS）損傷PC12細(xì)胞的拮抗作用及其分子機(jī)制。
　　方法：(1)培養(yǎng)通過神經(jīng)生長因子刺激后高分化的腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤即PC12細(xì)胞。（2）采用 CCK-8法檢測不同濃度 LPS對 PC12細(xì)胞活力的影響，選擇合適的LPS損傷劑量；采用CCK-8法檢測不同濃度H2S對同一濃度LPS對PC12細(xì)胞損傷的拮抗作用，并選擇合適的劑量進(jìn)行進(jìn)一步研究。（3）在4中不同的因素處理下，用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化

2、。（4）采用Hochest染色觀察H2S對LPS誘導(dǎo)PC12細(xì)胞神經(jīng)毒效應(yīng)的影響。（5）采用流式分析技術(shù)（FCM)檢測H2S對LPS誘導(dǎo) PC12細(xì)胞損傷及拮抗作用引起的細(xì)胞周期變化。（6）用 western blot測定COX-2、裂解型Caspase-3、Erk1/2、phosph-Erk1/2、P38MAPK、phosph-P38MAPK、NF-kB、p-NF-kB的蛋白含量。
　　結(jié)果：(1)采用對數(shù)生長期PC12細(xì)胞進(jìn)行

3、試驗(yàn)。（2）采用CCK-8法檢測出LPS對PC12細(xì)胞活力損傷呈濃度增長依賴性； CCK-8法檢測出H2S對LPS損傷的拮抗作用也呈濃度依賴性，但是當(dāng)達(dá)到或超過1000μg/ml時(shí)該拮抗作用消失，反而對PC12細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用。（3）形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，LPS處理24 h后部分細(xì)胞形態(tài)有所變化，突觸消失，由梭形變成了橢圓形，細(xì)胞的連接松散,但經(jīng)過H2S預(yù)處理30 min后再加 LPS的細(xì)胞組較只加 LPS細(xì)胞組橢圓形細(xì)胞減少，細(xì)胞相對連接緊

4、密。(4) Hoechst染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，LPS處理24 h后細(xì)胞核出現(xiàn)明顯固縮，但經(jīng)過H2S預(yù)處理后的核固縮細(xì)胞的數(shù)目明顯減少。(5)FCM分析發(fā)現(xiàn)LPS處理后的細(xì)胞S期比率下降， H2S預(yù)處理干預(yù)后比率明顯升高。(6)H2S可以抑制 COX-2、裂解型 Caspase-3、phosph-P38MAPK、p-NF-kB等蛋白的表達(dá)，但可上調(diào)phosph-Erk1/2的表達(dá)。
　　結(jié)論:H2S可抑制LPS誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，表明H