PC-B2抗AFB1對L-02肝細胞氧化損傷及CYP1A2、3A4酶活力及其基因表達的影響.pdf

1、目的：本研究通過對PC-B2抗AFB1對L-02肝細胞氧化損傷和I相代謝酶CYP1A2、3A4活力及基因表達影響的研究，探討PC-B2干預(yù)AFB1致肝細胞損傷的效果及機理，初步明確PC-B2對肝細胞的保護作用，為今后進一步開展保肝防癌的治療和預(yù)防提供科研基礎(chǔ)。
　　方法：采用體外細胞實驗，以含PC-B2或/和AFB1的培養(yǎng)液對生長狀態(tài)良好且處于對數(shù)期的人胚肝細胞（L-02細胞）體外培養(yǎng)。實驗分空白對照、溶劑對照、AFB1染毒、PC

2、-B2處理和PC-B2干預(yù)共五組。用30μg/ml為AFB1實驗染毒濃度；3、10、30μg/ml為PC-B2實驗處理和干預(yù)濃度。倒置熒光顯微鏡觀察并拍照記錄細胞生長狀態(tài)，噻唑藍法檢測細胞增殖活力的變化，吸光度法測定脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量及抗氧化酶系中SOD、GSH-PX活性，熒光酶標(biāo)法測定細胞的CYP1A2、CYP3A4酶活力，熒光定量PCR法測定CYP1A2、CYP3A4基因表達水平。數(shù)據(jù)資料錄入SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件進行分

3、析。
　　結(jié)果：與溶劑對照組相比，以30μg/ml AFB1染毒后，L-02細胞胞膜結(jié)構(gòu)不清，漂浮細胞增多，細胞活力（％）（69.9±2.46）明顯受到抑制（P＜0.05）；以PC-B2施加干預(yù)，在30μg/ml PC-B2干預(yù)劑量下，L-02細胞活性較AFB1染毒組顯著升高（P＜0.05）。
　　AFB1染毒后，誘導(dǎo)L-02細胞MDA生成量較溶劑對照組增多明顯（P＜0.05），用不同濃度PC-B2干預(yù)處理后，MDA生成量較

4、AFB1染毒組明顯減少（P＜0.05）。
　　AFB1染毒組L-02細胞SOD和GSH-PX活力（U/mgprot）分別為35.96±0.83和211.16±9.98，較溶劑對照組40.01±0.54，287.10±6.96均明顯降低（P＜0.05）；與AFB1染毒組相比，用30μg/ml PC-B2干預(yù)可顯著抑制AFB1所致L-02細胞SOD和GSH-PX活力的降低（P＜0.05），數(shù)值分別為42.2±1.32，263.04±1

5、3.94。
　　相對空白對照組，PC-B2單獨處理組L-02細胞CYP1A2、CYP3A4酶活力均略有降低，其中以30μg/ml PC-B2處理劑量降低明顯（P＜0.05）；AFB1染毒組L-02細胞CYP1A2、CYP3A4酶活力較溶劑對照組明顯升高（P＜0.05）；而PC-B2干預(yù)組CYP1A2、CYP3A4酶活力較AFB1染毒組降低（P＜0.05），且高劑量PC-B2干預(yù)對酶活性的影響更明顯（P＜0.05）。
　　與溶

6、劑對照組比較，30μg/ml AFB1作用24h后，L-02細胞CY P1A2、CYP3A4基因表達升高，分別為溶劑對照組的9.42、8.38倍（P＜0.05）。PC-B2干預(yù)組細胞CYP1A2、CYP3A4基因表達較AFB1染毒組明顯降低，且隨PC-B2干預(yù)濃度增大作用越明顯（P＜0.05）。PC-B2處理組基因表達水平有所升高，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.在體外細胞實驗中，30μg/ml AFB1能明顯抑制L-02細胞

7、生長，而3~30μg/ml PC-B2能夠促進L-02細胞生長，且能夠減輕AFB1染毒所致的細胞生長抑制。2. PC-B2能減輕AFB1致L-02細胞抗氧化系統(tǒng)的損傷，一方面抑制AFB1誘導(dǎo)的MDA生成，另一方面升高SOD、GSH-PX酶的活力。3. AFB1染毒后，L-02細胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其基因表達升高，PC-B2干預(yù)可抑制這兩種酶活力及基因表達，提示PC-B2可能通過干預(yù)AFB1在體內(nèi)的代謝發(fā)揮作用。4. PC