PC-B2對AFB1致L-02細(xì)胞DNA損傷及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　原花青素B2（procyanidin B2，PC-B2）是一種廣泛存在于植物中的多酚類化合物，具有清除自由基、抗癌等多種生物學(xué)功能。黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）是高溫高濕地區(qū)常見的一種霉菌毒素，可導(dǎo)致肝細(xì)胞急、慢性損傷，流行病學(xué)研究表明，AFB1與人類肝癌的發(fā)生明顯相關(guān)，其機(jī)制可能與AFB1代謝產(chǎn)物及代謝過程產(chǎn)生的自由基造成的氧化損傷有關(guān)。PC-B2在拮抗AFB1致肝細(xì)胞DNA氧化損傷方面的作用

2、如何，相關(guān)文獻(xiàn)較少。本研究旨在探討PC-B2對AFB1致人肝細(xì)胞DNA氧化損傷的干預(yù)作用，探索其可能作用機(jī)制，為原花青素在防治AFB1相關(guān)肝病的合理應(yīng)用提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　采用完全隨機(jī)設(shè)計的體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗，以生長狀態(tài)良好且處于對數(shù)期的人胚肝細(xì)胞（L-02細(xì)胞）為靶細(xì)胞，用不同濃度AFB1和PC-B2分別作用于L-02細(xì)胞并測定其細(xì)胞增殖活力的變化情況，并選擇適宜的染毒和處理劑量；以選定劑量AFB1染毒，制

3、備肝細(xì)胞損傷模型，用不同濃度PC-B2干預(yù)并進(jìn)行分析。本實驗分五個組：(1)空白對照組：只有L-02細(xì)胞和完全培養(yǎng)液；(2)溶劑對照組：加入含溶劑DMSO的培養(yǎng)液培養(yǎng)；(3)AFB1染毒組：加入含AFB1的培養(yǎng)液培養(yǎng)；(4)PC-B2處理組：分別加入含不同濃度PC-B2的培養(yǎng)液培養(yǎng)；以上各組細(xì)胞均孵育24h。(5)PC-B2干預(yù)組：先加入含PC-B2的培養(yǎng)液孵育12h，然后用新的含不同濃度PC-B2和一定劑量AFB1的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24

4、h。實驗后收集細(xì)胞進(jìn)行分析，以MTT法測定細(xì)胞增殖活力的變化；通過酶聯(lián)免疫吸附實驗測定細(xì)胞中8-OHdG的含量，判斷PC-B2對肝細(xì)胞DNA氧化損傷的影響，再應(yīng)用熒光定量PCR法檢測DNA修復(fù)基因hOGG1及其它相關(guān)基因的表達(dá)水平，實驗從細(xì)胞和分子水平二個方面分析PC-B2拮抗AFB1致肝細(xì)胞損傷的作用與機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1. AFB1在10~40μg/ml的濃度范圍內(nèi)對L-02肝細(xì)胞生長呈劑量依賴性抑制作用，30μg

5、/ml作用24h細(xì)胞增殖活力為69.9％，選為實驗染毒濃度；PC-B2在100μg/ml時抑制細(xì)胞生長，25、50、75μg/ml促進(jìn)細(xì)胞生長，且25μg/ml干預(yù)24h作用最明顯，據(jù)此實驗設(shè)計3、10、30μg/ml為PC-B2干預(yù)劑量。
　　2. PC-B2干預(yù)組較30μg/ml AFB1染毒組細(xì)胞活力明顯升高。高劑量干預(yù)組（30μg/ml PC-B2）與染毒組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3. AFB1染

6、毒組8-OHdG（ng/ml）含量為2.779±0.089，明顯高于溶劑對照組0.580±0.045（P＜0.05）；PC-B2干預(yù)組8-OHdG含量分別為2.550±0.078、2.376±0.109、1.873±0.065，均高于AFB1染毒組（P＜0.05）。
　　4. AFB1染毒組hOGG1基因表達(dá)明顯低于對照組（P＜0.05），PC-B2干預(yù)組細(xì)胞hOGG1基因表達(dá)明顯高于AFB1染毒組（P＜0.05），分別為AFB1