左旋-1-甲基色氨酸聯(lián)合DC疫苗抗乳腺癌免疫效應(yīng)的研究.pdf

1、目的：
　　確定小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1抗原致敏的樹突狀細(xì)胞（DC）疫苗，在體內(nèi)外抗腫瘤免疫的效應(yīng)；探討吲哚-2,3-雙加氧酶(IDO)化學(xué)抑制劑左旋-1-甲基色氨酸（L-1-MT）聯(lián)合DC疫苗治療對荷乳腺癌小鼠腫瘤引流淋巴結(jié)（TDLN）中IDO表達(dá)水平的抑制程度及其增強(qiáng)荷瘤小鼠腫瘤免疫應(yīng)答的機(jī)制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)BALB/c小鼠骨髓來源的DC，用小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1凍融抗原致敏來制備腫瘤特異性DC疫苗。流式

2、細(xì)胞儀檢測DC成熟表型；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR）檢測DC刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力；以4T1為靶細(xì)胞，DC致敏的T細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞檢測細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）體外特異性殺瘤效應(yīng)。
　　2、雌性BALB/c小鼠于第四脂肪墊下接種乳腺癌細(xì)胞4T11×105 cell/只建立荷瘤小鼠模型。荷瘤小鼠隨機(jī)分成對照組，DC疫苗組，L-1-MT組，L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組，分別給予生理鹽水、DC疫苗、L-1-MT、L-1-MT聯(lián)合DC疫苗治療

3、。測量腫瘤大小，描繪腫瘤生長曲線；于接種后第21d處死小鼠，取各組小鼠腫瘤組織，TDLN及脾臟；稱取腫瘤重量；Western blot測定TDLN中IDO表達(dá)水平，流式細(xì)胞儀檢測TDLN及脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Tregs比例；MTT比色法檢測荷瘤小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞特異性細(xì)胞毒作用。
　　結(jié)果：
　　1、4T1凍融抗原致敏的DC（4T1-DC）組表面共刺激分子CD40，CD80， CD86的表達(dá)明顯高于未致敏DC

4、（DC）組(P＜0.01)；4T1-DC具有更強(qiáng)的刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力，在刺激細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞比例為1∶10時(shí)的刺激指數(shù)最高，4T1-DC組、DC組分別為8.45±0.24、6.56±0.29（P＜0.01）；在效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞比值為40∶1和20∶1時(shí)，4T1-DC組致敏的CTL體外特異性殺瘤效應(yīng)均高于DC組分別為35.03±1.01、27.02±1.33和31.00±1.06、23.96±1.06（P＜0.01）。
　　2、接

5、種乳腺癌細(xì)胞4T1后的腫瘤生長曲線顯示：L-1-MT聯(lián)合DC疫苗組腫瘤生長速度最慢；第21天時(shí)的腫瘤體積和重量均為 CON組＞DC疫苗組＞L-1-MT組＞L-1-MT+DC組（P＜0.05）。L-1-MT+DC聯(lián)合治療組與CON組相比，抑瘤率為43％。
　　3、Western blot檢測各組 TDLN中 IDO相對表達(dá)量及流式細(xì)胞儀測定的TDLN與脾臟中 CD4+CD25+Foxp3+Tregs的比例均為 DC疫苗組＞CON組＞

6、L-1-MT+DC組＞L-1-MT組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.應(yīng)用DC疫苗治療的荷乳腺癌小鼠TDLN中IDO表達(dá)明顯增高，且TDLN及脾臟CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量增多，這可能是影響乳腺癌免疫治療效果的重要因素之一。
　　2. L-1-MT可有效抑制荷乳腺癌小鼠體內(nèi)IDO蛋白的表達(dá)，同時(shí)可以下調(diào)小鼠TDLN及脾臟內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Tregs的數(shù)量，從而增強(qiáng)DC疫苗抗腫瘤效