補(bǔ)體C3的免疫共振散射光譜分析.pdf

1、第一部分: 介紹了共振散射技術(shù)發(fā)展歷史、分析應(yīng)用以及發(fā)展前景。綜述了金納米微粒的制備、表征、組裝和生物標(biāo)記中的應(yīng)用以及補(bǔ)體C3 的分析進(jìn)展。 第二部分: 免疫共振散射光譜分析法簡(jiǎn)便快速測(cè)定補(bǔ)體C3利用補(bǔ)體C3 與羊抗人C3 抗體在pH 6.0 的Na2HPO4-C6H8O7 緩沖溶液和聚乙二醇(PEG) 存在下發(fā)生特異性反應(yīng)生成免疫抗體抗原復(fù)合物，導(dǎo)致體系在340nm 處的共振散射峰增強(qiáng)，建立了一個(gè)測(cè)定補(bǔ)體C3 的免疫

2、共振散射光譜法。C3 的濃度在0.167-3.33μg·mL-1 的范圍內(nèi)，與340nm 處的共振散射強(qiáng)度呈線性，回歸方程為I340nm=0.1603C＋12.42，R2＝0.9926，檢出限為0.058μg·mL-1。該方法具有試樣用量少、簡(jiǎn)單快速的特點(diǎn)，用于定量分析人血清中的補(bǔ)體C3，得到的結(jié)果較為滿意。 第三部分：快速靈敏的免疫納米金共振散射光譜探針測(cè)定補(bǔ)體C3采用改良檸檬酸鈉還原法制備了粒徑約為10.0nm 的膠體金顆粒

3、，在pH 7.5 條件下制備了金標(biāo)記羊抗人C3 抗體共振散射光譜探針。在pH 值為5.6 的Na2HPO4-C6H8O7緩沖溶液中及PEG 存在下，金標(biāo)記上羊抗人C3 抗體與補(bǔ)體C3 發(fā)生特異性結(jié)合，形成膠體金免疫復(fù)合物，導(dǎo)致體系在580nm 處的共振散射強(qiáng)度急劇增強(qiáng)。補(bǔ)體C3 濃度在0.00833-0.200μg·mL-1 范圍內(nèi)與共振散射強(qiáng)度的增大值呈良好線性關(guān)系，檢出限為0.0028μg·mL-1。此法用于人血清測(cè)定補(bǔ)體C3 具有

4、簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn)。獲得較滿意的結(jié)果。 第四部分：納米金標(biāo)免疫抗體催化增強(qiáng)反應(yīng)的共振散射光譜研究及其超痕量檢測(cè)補(bǔ)體C3在pH 7.5 條件下用金納米顆粒標(biāo)記羊抗人補(bǔ)體C3 獲得C3 共振散射光譜探針。當(dāng)pH 值為5.6 的Na2HPO4-C6H8O7 緩沖溶液及PEG 存在條件下，金標(biāo)記羊抗人補(bǔ)體C3與補(bǔ)體C3 發(fā)生特異性結(jié)合生成膠體金免疫復(fù)合物。以12000rpm 速度離心分離獲得未反應(yīng)的金標(biāo)抗上層溶液。以它作晶種，在pH 2.

5、97 檸檬酸鈉-鹽酸緩沖溶液-53.33μg·mL-1HAuCl4-74.13μg·mL-1NH2OH·HCl 溶液中及37℃條件下反應(yīng)3 分鐘內(nèi)，免疫金納米微粒粒徑表面積迅速增大，大大提高了585nm 處金納米微粒的共振散射強(qiáng)度I585nm。結(jié)果表明，隨著C3 濃度增大，離心上層溶液中金標(biāo)抗?jié)舛冉档?，I585nm 線性降低。其降低值△I585nm 與補(bǔ)體C3 濃度在5.0-160.0pg·mL-1 范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系, 檢出限為1.