蘇云金芽孢桿菌分離株基因類型的PCR檢測(cè)、RFLP分析及特異菌株cry1Ac全基因克隆.pdf_第1頁(yè)
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1、從216份采集自全國(guó)各地的各種樣品分離得到Bt菌株170余株.對(duì)174株野生Bt菌標(biāo)進(jìn)行了cry1,cry1Ac,cry1C,cry1E,cry1I,cry2,cry3基因的特異引物PCR鑒定,分析了各類cry基因的檢出率及組合的特點(diǎn).對(duì)10株來(lái)源特殊或具高毒力的菌株進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)有5株菌株有可能含有新的cry1類基因.其中,15A3菌株很有可能含有一新的cry1Aa基因.按cry1Aa保守序列設(shè)計(jì)了特異引物,經(jīng)PCR未能得到該基因,

2、結(jié)合E-PCR分析表明,該菌株很有可能含有一新的cry1類基因.分離株3＃菌株含有對(duì)棉鈴蟲高效的cry1Ac基因,不含有對(duì)甜菜夜蛾高效的cry1C基因,卻對(duì)棉鈴蟲和甜菜夜蛾均有高毒力.自行設(shè)計(jì)了cry1Ac基因特異引物,引物覆蓋區(qū)域包括起始密碼子上游的150bp的啟動(dòng)區(qū)和終止密碼子下游約300bp的序列.經(jīng)PCR擴(kuò)增得到3＃菌株的cry1Ac全長(zhǎng)基因.經(jīng)兩步克隆,將此基因連接至穿梭載體pHT315上,電轉(zhuǎn)化進(jìn)Bt菌株t1897,并表達(dá)出

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