蘇云金芽胞桿菌Cry1Ac蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的定點突變及結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩132頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、蘇云金芽胞桿菌(Bt)是應(yīng)用范圍最廣的殺蟲微生物,其殺蟲活性主要來源于芽胞形成過程中產(chǎn)生的晶體蛋白,研究殺蟲晶體蛋白的分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系越來越受到重視。運用定點突變技術(shù)和結(jié)合生物信息學(xué)技術(shù)研究,將有助于明確和闡釋伴胞晶體蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系。
  本文運用生物信息學(xué)技術(shù),證實β20-β21 loop為Cry1Ac5蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ中獨特的功能環(huán),通過定點突變技術(shù)研究了β20-β21 loop的結(jié)構(gòu)和功能間的相互關(guān)系,獲得了毒力或穩(wěn)

2、定性提高的突變子,研究內(nèi)容如下:
  比較了Cry1A蛋白的各級結(jié)構(gòu)并進一步分析Cry1蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ的進化樹,確定Cry1Ac5蛋白的結(jié)構(gòu)域Ⅲ作為研究對象。分析Cry1Ac5結(jié)構(gòu)域Ⅲ及其β20-β21 loop的特點,發(fā)現(xiàn)在H518FPST522、N543WGNSSI549、F578TSSLGN584等區(qū)域不同于其它Cry1A蛋白,Cry1Ac5的β20-β21 loop含有高度保守苯丙氨酸、絲氨酸及甘氨酸殘基的F578、S581

3、、G583,由此推測F578、S581、G583這三個位點極有可能是關(guān)鍵位點, Cry1Ac5蛋白β20-β21 Loop結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及蛋白構(gòu)象的改變可能此有關(guān),確定以β20-β21 loop為關(guān)鍵,通過定點突變研究其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。
  運用定點突變技術(shù)對Cry1Ac5的蛋白結(jié)構(gòu)β20-β21 loop上10個殘基進行丙氨酸掃描突變,所有突變子包括(N576A、F578A、T579A、S580A、S581A、L582A、G58

4、3A、N584A、I585A、V586A)都能表達130 kDa蛋白和產(chǎn)生菱形晶體,室內(nèi)生測表明,突變子I585A和S581A對棉鈴蟲的毒力分別提高了1.86倍和1.45倍,而突變子G583A對棉鈴蟲的毒力則下降明顯,其余突變子的毒性也有所下降。對Cry1Ac5蛋白分子的三維結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),野生型Cry1Ac蛋白的579、580、582、585位置氨基酸的側(cè)鏈的側(cè)鏈向外伸向Cry1Ac5蛋白分子的表面,Cry1 Ac5蛋白和其受體的相互作

5、用很可能與T579A、S580A、L582A、I585A的功能有關(guān),而其余位置的側(cè)鏈向內(nèi)伸向蛋白分子內(nèi)側(cè),可能與維持蛋白的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性有關(guān)。
  對I585進一步突變,構(gòu)建、表達了I585E、I585F、I585T、I585V突變子,并對其進行了毒力測定:I585F、I585E、I585T的毒力下降明顯,而I585V的毒力只略有下降;對I585突變子進行了蛋白酶穩(wěn)定性和存貯穩(wěn)定性研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)I585E、I585T、I585F的蛋白

6、酶及存貯穩(wěn)定性降低,而I585A的蛋白酶及存貯穩(wěn)定性均明顯提高;I585位的側(cè)鏈對Cry1 Ac5蛋白穩(wěn)定產(chǎn)生了不利影響,對比野生型Cry1Ac5、I585A的晶體形態(tài)及殺蟲活性,發(fā)現(xiàn)I585A殺蟲活性高出野生Cry1Ac1.7倍以上。
  本研究第一次發(fā)現(xiàn)了Cry1Ac5此蛋白其結(jié)構(gòu)域Ⅲ上的β20-β21loop結(jié)構(gòu)的獨特之處,并且,首次報道Cry1Ac5蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ中的β20-β21 loop結(jié)構(gòu)在Cry1Ac5蛋白功能中發(fā)揮

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論