具有殺松材線蟲活性的蘇云金芽孢桿菌cry基因的克隆.pdf

1、化學(xué)農(nóng)藥在防治農(nóng)業(yè)有害生物方面的應(yīng)用效果顯著,但是由于化學(xué)農(nóng)藥的過量使用,環(huán)境問題也隨之產(chǎn)生。生物農(nóng)藥以其獨(dú)顯的高效低毒的特點(diǎn),將在農(nóng)業(yè)病蟲害防治中得到越來越廣泛的應(yīng)用。蘇云金芽孢桿菌制劑是目前研究最為深入,應(yīng)用最為廣泛的生物農(nóng)藥。其產(chǎn)物的結(jié)晶伴胞晶體蛋白對磷翅目、半翅目昆蟲具有特異的毒殺效果。挖掘我國豐富的Bt資源,篩選出更多具有殺蟲活性的Bt菌,分離克隆其編碼殺蟲蛋白的基因,對構(gòu)建Bt工程菌,培育轉(zhuǎn)Bt的抗蟲植物具有深遠(yuǎn)的意義。

2、r>　　 松材線蟲是一種林業(yè)有害生物,對松樹具有毀滅性的危害,它通過松墨天牛進(jìn)行傳播,松樹一旦感染上松材線蟲,將在很短的時(shí)間內(nèi)死亡。目前,對松材線蟲的防治主要是針對其媒介昆蟲松墨天牛來進(jìn)行的,主要以化學(xué)防治為主,直接針對松材線蟲進(jìn)行防治難度較大,國內(nèi)外研究的較少。本實(shí)驗(yàn)室從環(huán)境中分離出80株蘇云金芽孢桿菌,初步篩選出8株對松材線蟲具有毒殺作用的菌株,進(jìn)一步提取這8株菌株的伴孢晶體蛋白,對松材線蟲進(jìn)行毒力測定,最后篩選出一株對松材線蟲具

3、有最強(qiáng)毒殺活性的菌株,命名為ZJFC85菌株。
　　 已經(jīng)知道對松材線蟲具有毒殺活性的是ZJFC85菌株編碼產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白,為了能為培育出抗松材線蟲病的松樹樹種提供遺產(chǎn)材料,本實(shí)驗(yàn)室將克隆出ZJFC85菌株中能編碼產(chǎn)生的伴孢晶體蛋白cry基因。通過查閱文獻(xiàn),設(shè)計(jì)9對cry基因保守區(qū)域的引物,以ZJFC85菌株質(zhì)粒DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)展,擴(kuò)增出一段保守區(qū)域序列cryl,對cryl基因進(jìn)行克隆,克隆產(chǎn)物送出測序,測序結(jié)果分析