MAGE-A3-C2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義的研究.pdf

1、背景和目的
　　肺癌的發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)成為我國(guó)乃至全世界死亡率最高的惡性腫瘤。外科手術(shù)治療是早期肺癌患者的首選治療措施。但是大部分病人因早期癥狀不典型，確診時(shí)已經(jīng)屬于晚期而失去手術(shù)機(jī)會(huì)?；熀?或放療是這類患者的首選治療方法，但是化療和放療的療效有限且常引起嚴(yán)重的副反應(yīng)。免疫治療能引起機(jī)體針對(duì)腫瘤的主動(dòng)和被動(dòng)免疫，因其潛在的抗腫瘤效應(yīng)和更小的副反應(yīng)而應(yīng)用于臨床。近年來(lái)，各種免疫治療手段層出不窮，在臨床前和臨床試驗(yàn)中突顯了明顯的

2、抗腫瘤效應(yīng)。深入的機(jī)制研究是開發(fā)較為有效的免疫治療手段的前提。
　　腫瘤治療的關(guān)鍵是選擇合適的靶點(diǎn)。癌睪基因編碼的抗原（Cancer-testis Antigen, CTA）在癌癥免疫治療領(lǐng)域中被廣泛研究，它在部分正常組織（睪丸和胚胎組織）和各種惡性腫瘤中表達(dá)，在正常組織中不表達(dá)。黑色素瘤相關(guān)抗原（melanoma antigen gene, MAGE）是CTA的一個(gè)亞家族成員，和 CTA有著相同的表達(dá)模式。MAGE在腫瘤細(xì)胞的表

3、達(dá)與腫瘤的生長(zhǎng)、疾病的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后有關(guān)，在離體實(shí)驗(yàn)中通過降低腫瘤細(xì)胞自體的MAGE表達(dá)能夠使腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為發(fā)生改變，如：降低腫瘤細(xì)胞的黏附性和遷移的能力。而且MAGE的表達(dá)情況在臨床上可以用來(lái)預(yù)測(cè)多種惡性腫瘤的預(yù)后。針對(duì)家族成員例如 MAGE-A3的免疫治療可能代表對(duì) NSCLC的潛在治療策略，并且MAGE-A3抗原特異性T細(xì)胞受體（TCR）修飾的T細(xì)胞治療最近已顯示有效殺死肺癌細(xì)胞。
　　本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量

4、PCR方法對(duì)206例非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁組織中MAGE-A3和 MAGE-C2的mRNA表達(dá)情況進(jìn)行了研究，并分析其表達(dá)與肺癌臨床病理特征（性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期）以及預(yù)后之間的關(guān)系；用基因沉默的方法將肺癌細(xì)胞系 MAGE-A3下調(diào)，觀察處理前后MAGE-A3基因表達(dá)水平的變化并探索 MAGE-A3的表達(dá)對(duì)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。
　　方法
　　1、選取2014年10月至2016年05月鄭州大學(xué)第

5、一附屬醫(yī)院胸外科收治的非小細(xì)胞肺癌初治患者206例。所有患者在病理上被診斷為非小細(xì)胞肺癌?；颊叩倪x擇標(biāo)準(zhǔn)包括進(jìn)行肺癌的根治性手術(shù)，具有獲得腫瘤組織的機(jī)會(huì)。所有患者簽署書面知情同意書，并且患者在進(jìn)行手術(shù)之前沒有接受過放化療等輔助治療措施。用RT-PCR方法來(lái)檢測(cè)肺癌組織和配對(duì)的正常組織中MAGE-A3/C2的表達(dá)，分析MAGE-A3/C2表達(dá)與臨床病理參數(shù)及生物學(xué)特性的關(guān)系。收集2010年10月至2011年10月在我院胸外科住院行肺癌根治

6、術(shù)具有完整病理資料的80例肺癌患者進(jìn)行回顧性分析，術(shù)后通過電話方式隨訪患者的生存情況。
　　2、合成小干擾RNA片段后轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞，觀測(cè)轉(zhuǎn)染效率，RT-PCR方法檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染后MAGE-A3基因的表達(dá)情況，用流式細(xì)胞術(shù)、CCK8試劑盒法、細(xì)胞成球?qū)嶒?yàn)和transwell法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞凋亡、增殖、侵襲能力的影響。
　　結(jié)果
　　1．MAGE-A3和 MAGE-C2在肺癌組織中高表達(dá)，在癌旁組織未檢測(cè)到MAGE-A3和

7、MAGE-C2的表達(dá)。
　　2．MAGE-A3的表達(dá)與NSCLC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與NSCLC患者的疾病分期相關(guān)；
　　3．MAGE-A3陽(yáng)性的NSCLC患者預(yù)后較差，MAGE-A3在臨床上能夠作為NSCLC患者的預(yù)后指標(biāo)。
　　4．下調(diào)MAGE-A3后對(duì)肺癌細(xì)胞株的凋亡和增殖能力沒有影響。
　　5． MAGE-A3沉默后肺癌細(xì)胞株的克隆形成能力減弱，侵襲轉(zhuǎn)移能力減弱， MAGE-A3能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的上皮細(xì)