2型糖尿病患者單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)M1-M2型極化失衡的臨床研究.pdf

1、目的：我國成年人糖尿病的患病率快速增加，從2007年的9.7％到2010年增長至11.6%，糖尿病及其多種并發(fā)癥嚴(yán)重危害了人民的健康。2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，傳統(tǒng)觀念認(rèn)為它屬于代謝性疾病的范疇，而現(xiàn)代研究認(rèn)為它也是一種慢性系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。慢性系統(tǒng)炎癥的過程中伴隨著單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的極化，主要的極化形式為促炎型 M1型和抗炎型M2型。2010年日本的Satoh等發(fā)現(xiàn)肥胖的2型糖尿病患者外周血單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)存在極化失衡，促炎型M1型細(xì)胞

2、的表面標(biāo)志物表達(dá)水平增高，而抗炎型M2型細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)水平降低。所以本研究推測單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)極化失衡參與了2型糖尿病的發(fā)病，通過流式細(xì)胞術(shù)分析2型糖尿病患者外周血單核細(xì)胞M1/M2型的極化狀態(tài)，旨在探討單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)極化失衡與2型糖尿病及其并發(fā)癥的關(guān)系。
　　方法：⑴采用橫斷面研究方法，隨機(jī)選取天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院住院的2型糖尿病人108例，天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院空港國際醫(yī)院體檢中心正常對照50例。收集入選對象的一般情況、生

3、化指標(biāo)及影像學(xué)檢查結(jié)果。⑵清晨空腹留取受試者肘靜脈血，采用流式細(xì)胞儀檢測受試者外周血中單核細(xì)胞M1型和M2型的比例，其中M1型細(xì)胞標(biāo)記抗體為CD68（白細(xì)胞分化抗原68）和CCR2（趨化因子-C受體-2），而M2型細(xì)胞則采用CD163和CX3CR1（趨化因子-X3C受體-1）2種抗體進(jìn)行標(biāo)記。并且計算M1/M2型比值，采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)的方法比較2型糖尿病患者和對照組外周血中單核細(xì)胞M1型和M2型的比例以及M1/M2型比值的差異。并且

4、根據(jù)2型糖尿病并發(fā)癥的有無分成若干亞組，探討單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)極化失衡與并發(fā)癥的關(guān)系。⑶使用單個核細(xì)胞分離液提取2型糖尿病患者和正常人外周血的原代單個核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)24小時，待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)，共分成4組：健康對照組（健康人單個核細(xì)胞）、病例對照組（T2DM單個核細(xì)胞）、健康干預(yù)組（健康人單個核細(xì)胞+0.1mg/L LPS）和病例干預(yù)組（T2DM單個核細(xì)胞+0.1mg/L LPS），37℃、5%CO

5、2孵箱中干預(yù)24h，然后進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析炎癥刺激后的單核細(xì)胞M1/M2型極化狀態(tài)的變化情況。
　　結(jié)果：①糖尿病組患者外周血M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值高于正常對照組，M2型細(xì)胞比例低于正常對照組（均P<0.05)。②大血管并發(fā)癥組和大血管、微血管并發(fā)癥并存組糖尿病患者外周血的M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組，而大血管、微血管并發(fā)癥并存組M1/M2型比值高于正常對照組、微血管并發(fā)癥組和大血管并發(fā)癥組（均P<0.05）。

6、③同時患有3種糖尿病大血管并發(fā)癥的患者外周血中M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值均高于單純糖尿病組、僅患有1種或2種大血管并發(fā)癥組，而同時患有3種大血管并發(fā)癥的患者M(jìn)2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組和僅患有1種大血管并發(fā)癥組（均P<0.05）。其中，冠心病組M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值高于單純糖尿病組，而M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組（均P<0.05）。腦血管病變組M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組，而M1/M2型比值高于

7、單純糖尿病組（均P<0.05）。下肢血管病變組外周血M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組，而M1/M2型比值高于單純糖尿病組（均P<0.05）。④同時患有3種糖尿病微血管并發(fā)癥的患者外周血中M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值均高于單純糖尿病患者、僅患有1種或2種微血管并發(fā)癥的糖尿病患者，而同時患有3種微血管并發(fā)癥的M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病患者、僅患有1種或2種微血管并發(fā)癥組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。其中，早期DN組

8、和臨床DN組M1型單核細(xì)胞比例高于DM組（均P<0.05）。DR組M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值高于單純糖尿病組，而M2型單核細(xì)胞比例低于單純糖尿病組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P>0.05）。DPN組和單純糖尿病組兩組間 M1、M2型單核細(xì)胞比例和 M1/M2型比值沒有明顯差異（均P>0.05）。⑤病程≥10年組的糖尿病患者外周血M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值均高于病程<10年組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。而兩組

9、間M2型單核細(xì)胞比例無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。⑥經(jīng)過多重線性回歸分析，結(jié)果顯示 M1型單核細(xì)胞比例與舒張壓、D-二聚體和hs-CRP相關(guān)，而 M2型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值僅與hs-CRP相關(guān)，具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05)。⑦0.1mg/L的LPS干預(yù)24小時后通過流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)：健康對照和糖尿病患者的M1型單核細(xì)胞比例和M1/M2型比值均增高，而且糖尿病患者的增高幅度大于健康對照，而健康對照和糖尿病患者的M2型單核細(xì)

10、胞比例均降低，而且糖尿病患者的降低幅度大于健康對照，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴2型糖尿病患者存在單核巨噬細(xì)胞M1/M2型極化失衡，促炎型M1型細(xì)胞增多，而抗炎型M2型細(xì)胞減少。這種極化失衡在糖尿病大血管并發(fā)癥和糖尿病腎病患者中比較明顯著，病程長者更明顯。⑵2型糖尿病患者體內(nèi)的單核細(xì)胞具有前炎癥狀態(tài)，炎癥反應(yīng)更加強(qiáng)烈，而且單核巨噬細(xì)胞M1/M2型極化失衡與hs-CRP相關(guān)，提示炎癥、單核巨噬細(xì)胞M1/M2型