PGF誘導(dǎo)的MAPK與立早基因(ATF3、NR4A1和NR4A2)在假孕大鼠黃體中的表達(dá)與定位.pdf

1、黃體的主要功能是分泌孕酮，它的退化意味著下一個(gè)發(fā)情周期的開(kāi)始，因此，它在卵巢周期性調(diào)節(jié)和妊娠的維持中起著重要作用。在嚙齒類(lèi)動(dòng)物中，黃體退化首先會(huì)發(fā)生功能性退化（孕酮合成水平明顯降低），而后發(fā)生結(jié)構(gòu)性退化（細(xì)胞凋亡的發(fā)生）。本論文采用蘇木素-伊紅染色(HE)、酶聯(lián)免疫測(cè)定(ELISA)、免疫組織化學(xué)(IHC)、RT-PCR、real-time PCR、免疫印跡（Western blot）等方法，研究MAPK與立早基因（ATF3、NR4A1

2、和NR4A2）在PGF誘導(dǎo)的假孕大鼠黃體退化過(guò)程中的表達(dá)模式及其可能作用，為進(jìn)一步研究哺乳動(dòng)物卵巢黃體退化提供試驗(yàn)依據(jù)。主要內(nèi)容如下:
　　1.ATF3與MAPK參與PGF誘導(dǎo)假孕大鼠黃體退化的作用研究
　　為了研究ATF3與MAPK成員參與PGF誘導(dǎo)假孕大鼠黃體退化的作用，本試驗(yàn)采用PMSG/hCG聯(lián)合處理構(gòu)建大鼠假孕模型。在假孕第七天注射PGF，分別在0h、10 min、30 min、1h、2h和4h頸椎脫臼法處死大鼠。

3、ELISA結(jié)果表明:血中孕酮水平呈時(shí)間依賴(lài)性下降。WB結(jié)果表明:在PGF處理2h，ATF3的表達(dá)量顯著上升(P＜0.01);而在30 min，p-ERK和p-JNK表達(dá)量顯著上升(P＜0.01);相比之下，p-p38的表達(dá)量卻沒(méi)有明顯變化。IHC結(jié)果表明:PGF處理后，黃體中p-ERK的染色自外向里逐漸減弱;而ATF3的染色相對(duì)均勻的分布在大、小黃體細(xì)胞的細(xì)胞核。這些結(jié)果提示PGF會(huì)誘導(dǎo)MAPK部分成員的磷酸化，它們的變化可能參與調(diào)控黃

4、體退化過(guò)程中ATF3表達(dá)的升高與孕酮水平的降低。
　　2.核受體NR4A1與NR4A2在PGF誘導(dǎo)的大鼠黃體退化中的定位及其表達(dá)規(guī)律
　　通過(guò)觀(guān)察核受體NR4A成員NR4A1與NR4A2在PGF誘導(dǎo)的大鼠黃體退化中的表達(dá)規(guī)律，推測(cè)其在大鼠黃體退化過(guò)程中的可能作用。在假孕第七天行PGF不同時(shí)間點(diǎn)（0h、30 min、1h、2h和4h）注射，采用RT-PCR和real-time PCR方法檢測(cè)卵巢中NR4A1與NR4A2 mRN

5、A表達(dá)變化，IHC觀(guān)察黃體中NR4A1與NR4A2的定位。結(jié)果:NR4A1蛋白主要定位在黃體細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，在卵母細(xì)胞和膜細(xì)胞上也有表達(dá)，且在PGF處理后，NR4A1 mRNA水平先上升而后下降，并且在30 min-1 h表達(dá)量最高，與生理鹽水組相比差異極顯著(P＜0.01)。而NR4A2在黃體中呈不均勻（片狀或顆粒狀）分布，大部分在黃體細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，并且在PGF處理后，NR4A2 mRNA水平的變化趨勢(shì)與NR4A1保持一致，處理