NR4A2基因在胃癌侵襲轉移中的作用及其機制研究.pdf

1、[目的]檢測胃癌(GC)中NR4A2基因表達水平，從NR4A2表達調控機制出發(fā)篩選新的選擇性剪接異構體，進一步檢測異構體在胃癌中的表達。探討NR4A2及其異構體與GC發(fā)生和轉移的關系。 [方法]1、采用實驗室前期cDNA基因表達譜芯片(GEO：GSM253487toGSM253498)分析結果，利用生物信息學方法篩選出胃癌轉移相關新基因NR4A2，采用RT-PCR，real-timePCR檢測28例手術切除的胃癌原發(fā)組織、癌旁正

2、常組織和轉移灶組織中NR4A2mRNA的表達，免疫組化檢測23例組織樣本NR4A2蛋白表達。2.從NR4A2基因調控機制出發(fā)，通過選擇性剪接數據庫(AlternativeSplicingDatabase，ASD)對基因NR4A2可能存在的選擇性剪接異構體進行預測，半定量RT-PCR檢測胃癌樣本中預測異構體的表達情況。PCR產物凝膠回收，T載體連接，經α篩選后轉染DH5α感受態(tài)細胞，菌液送測序，應用計算機軟件進行測定序列的比對分析。經驗證

3、從組織中擴增的產物與生物信息學預測結果一致，確認為新的選擇性剪接異構體。3.選擇28例配對樣本，采用real-timePCR檢測新剪接異構體在胃癌組織樣本中的表達。 [結果]同癌旁組織比較，NA4A2在20對原發(fā)胃癌組織中呈現低表達，P=：0.017；同原發(fā)癌組織比較，NA4A2在8對胃癌肝轉移樣本中呈現低表達，P值為：0.001。采用Envision免疫組化方法檢測NR4A2蛋白表達，無統計學意義(X2=1.543，P=0.6

4、72)，但陽性率趨勢同real-timePCR一致。發(fā)現2種新的剪切異構體NR4A2-Ⅰ和NR4A-Ⅱ，real-timePCR檢測表明同癌旁組織相比較兩種異構體在胃癌原發(fā)灶中表達下調(P=0.007，0.018)；同原發(fā)癌組織比較兩種異構體在轉移灶表達下調(P=0.004，0.016)。 [結論]NR4A2基因的表達水平與GC的轉移密切相關。確定NR4A2存在2種剪接異構體，證實其表達水平同胃癌轉移相關，其異構體是影響該基因表