NR4A2基因在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、[目的]檢測(cè)胃癌(GC)中NR4A2基因表達(dá)水平，從NR4A2表達(dá)調(diào)控機(jī)制出發(fā)篩選新的選擇性剪接異構(gòu)體，進(jìn)一步檢測(cè)異構(gòu)體在胃癌中的表達(dá)。探討NR4A2及其異構(gòu)體與GC發(fā)生和轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 [方法]1、采用實(shí)驗(yàn)室前期cDNA基因表達(dá)譜芯片(GEO：GSM253487toGSM253498)分析結(jié)果，利用生物信息學(xué)方法篩選出胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)新基因NR4A2，采用RT-PCR，real-timePCR檢測(cè)28例手術(shù)切除的胃癌原發(fā)組織、癌旁正

2、常組織和轉(zhuǎn)移灶組織中NR4A2mRNA的表達(dá)，免疫組化檢測(cè)23例組織樣本NR4A2蛋白表達(dá)。2.從NR4A2基因調(diào)控機(jī)制出發(fā)，通過(guò)選擇性剪接數(shù)據(jù)庫(kù)(AlternativeSplicingDatabase，ASD)對(duì)基因NR4A2可能存在的選擇性剪接異構(gòu)體進(jìn)行預(yù)測(cè)，半定量RT-PCR檢測(cè)胃癌樣本中預(yù)測(cè)異構(gòu)體的表達(dá)情況。PCR產(chǎn)物凝膠回收，T載體連接，經(jīng)α篩選后轉(zhuǎn)染DH5α感受態(tài)細(xì)胞，菌液送測(cè)序，應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行測(cè)定序列的比對(duì)分析。經(jīng)驗(yàn)證

3、從組織中擴(kuò)增的產(chǎn)物與生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果一致，確認(rèn)為新的選擇性剪接異構(gòu)體。3.選擇28例配對(duì)樣本，采用real-timePCR檢測(cè)新剪接異構(gòu)體在胃癌組織樣本中的表達(dá)。 [結(jié)果]同癌旁組織比較，NA4A2在20對(duì)原發(fā)胃癌組織中呈現(xiàn)低表達(dá)，P=：0.017；同原發(fā)癌組織比較，NA4A2在8對(duì)胃癌肝轉(zhuǎn)移樣本中呈現(xiàn)低表達(dá)，P值為：0.001。采用Envision免疫組化方法檢測(cè)NR4A2蛋白表達(dá)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=1.543，P=0.6

4、72)，但陽(yáng)性率趨勢(shì)同real-timePCR一致。發(fā)現(xiàn)2種新的剪切異構(gòu)體NR4A2-Ⅰ和NR4A-Ⅱ，real-timePCR檢測(cè)表明同癌旁組織相比較兩種異構(gòu)體在胃癌原發(fā)灶中表達(dá)下調(diào)(P=0.007，0.018)；同原發(fā)癌組織比較兩種異構(gòu)體在轉(zhuǎn)移灶表達(dá)下調(diào)(P=0.004，0.016)。 [結(jié)論]NR4A2基因的表達(dá)水平與GC的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。確定NR4A2存在2種剪接異構(gòu)體，證實(shí)其表達(dá)水平同胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)，其異構(gòu)體是影響該基因表