黃曲霉毒素的時間分辨熒光高靈敏免疫檢測技術.pdf

1、分類號密級UDC編號碩士學位論文黃曲霉毒素的時間分辨熒光高靈敏免疫檢測技術學位申請人：人：王坤指導教師：師：侯玉澤教授學科專業(yè)：業(yè)：食品科學學位類別：別：農(nóng)學2013年6月摘要論文題目：論文題目：黃曲霉毒素的時間分辨熒光高靈敏免疫檢測技術黃曲霉毒素的時間分辨熒光高靈敏免疫檢測技術專業(yè)：業(yè)：食品科學食品科學研究生：生：王坤指導教師：指導教師：侯玉澤教授侯玉澤教授摘要黃曲霉毒素B1（AFB1）是由真菌的部分產(chǎn)毒菌株產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，廣泛存

2、在于各類食品中，在自然界分布也很廣泛，它的毒性是最強的。黃曲霉毒素B1是主要對人類和動物的肝臟、腎臟的能夠產(chǎn)生強毒和強致癌，AFB1主要污染玉米、大豆、飼料等，進入到人和動物體內(nèi)，它會引起人和動物的很多病變，甚至死亡。世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機構（InternationalAgencyfResearchonCancerIARC）劃定為I類致癌物。要從各個方面嚴格控制AFB1對人類食品和動物飼料產(chǎn)生污染，將AFB1的危害降到最低，開發(fā)新的高

3、靈敏的檢測AFB1的方法尤為重要。隨著技術的不斷發(fā)展，時間分辨熒光免疫分析方法(Timeresolvedfluoimmunoassay，TRFIA)得到了快速的發(fā)展，它具有沒有放射性污染、檢測靈敏度高、試驗操作簡便、重復性好等多種優(yōu)點，另外TRFIA能夠滿足大量樣品的檢測。本研究通過分析AFB1的結構特點，先制備出人工抗原，再通過采集小鼠腹水的方法制備并純化得到單克隆抗體，成功制備出AFB1間接競爭TRFIA試劑盒并對其性能進行了評價，

4、確立了常見樣品的快速處理方法，為AFB1快速檢測試劑盒的應用及推廣打下了基礎。采用N羥琥珀酰亞胺酯（NhydroxysuccinieNHS）法和碳二亞氨法（EDC）將AFB1偶聯(lián)于載體蛋白BSA上，合成人工抗原AFB1BSA。并利用紫外掃描法（UV）、SDSPAGE凝膠電泳試驗及單克隆抗體等手段對人工抗原進行了初步鑒定，結果顯示：人工抗原的紫外吸收峰包含AFB1及蛋白載體的紫外掃描特征峰，且在此基礎上出現(xiàn)了偏移；其分子量較載體蛋白也有所

5、增加；具有良好的免疫原性，從而充分說明了AFB1人工抗原制備成功。采用稀土離子標記技術，應用單克隆抗體建立高靈敏的黃曲霉毒素Bl（AFB1）時間分辨熒光免疫分析法（AFB1TRFIA）。以AFB1BSA為免疫原制備抗AFB1抗體；AFB1與BSA的聯(lián)結物(AFB1BSA)為固相抗原，與游離AFB1共同競爭有限的AFB1抗體；用Eu3標記的羊抗鼠抗體作為二抗。該方法的靈敏度為0.0094μgL，測量范圍為0.0110gL，批內(nèi)和批間的變異