黃曲霉毒素M1免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的研究.pdf

1、分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)碩士學(xué)位論文黃曲霉毒素M1免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的研究學(xué)位申請(qǐng)人：人：蔡齊超指導(dǎo)教師：師：鄧瑞廣研究員侯玉澤教授學(xué)科專業(yè)：業(yè)：食品科學(xué)學(xué)位類別：別：農(nóng)學(xué)2014年4月摘要I論文題目：論文題目：黃曲霉毒素黃曲霉毒素M1免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的研究免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的研究專業(yè)：業(yè)：食品科學(xué)食品科學(xué)研究生：生：蔡齊超蔡齊超指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師：鄧瑞廣鄧瑞廣研究員研究員侯玉澤侯玉澤教授教授摘要現(xiàn)在，真菌毒素污染已經(jīng)成為食品中最嚴(yán)重的污

2、染之一，尤其是黃曲霉毒素污染。黃曲霉毒素包括很多種，它們都具有特別強(qiáng)的毒性，尤其是廣泛存在于牛奶中的黃曲霉毒素M1（AFM1），因其與人們的生活息息相關(guān)，所以被人們廣泛關(guān)注。AFM1是黃曲霉毒素B1（AFB1）在動(dòng)物體內(nèi)代謝產(chǎn)物，純品是無(wú)色片狀的長(zhǎng)方形晶體，熔點(diǎn)為299℃，能在365nm的紫外光下發(fā)出藍(lán)紫色的熒光。誤食了含有AFM1的食物后，可能會(huì)導(dǎo)致肝臟器官發(fā)生功能性衰竭，形成肝癌或直接引起死亡。目前，對(duì)于AFM1的檢測(cè)，人們常用的有

3、三種檢測(cè)方法，就是薄層色譜法、高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法。這些方法都存在較多的缺點(diǎn)，例如對(duì)樣品的前處理復(fù)雜、所用儀器昂貴、對(duì)操作人員要求高、靈敏度低、假性干擾結(jié)果等。而基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法具有靈敏性好、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單和可以進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)大規(guī)模檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，所以，建立AFM1免疫學(xué)的快速檢測(cè)方法就變得尤為迫切。本實(shí)驗(yàn)就旨在制備出AFM1的快速檢測(cè)試劑盒。本實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容及結(jié)果如下：1.AFM1人工抗原的合成與鑒定采用肟化法改造

4、AFM1，并使其分別偶聯(lián)于載體蛋白BSA和OVA上，得到免疫原AFM1BSA和包被原AFM1OVA，然后采用薄層色譜法和紫外分光光度法及SDSPAGE對(duì)肟化物和人工抗原進(jìn)行鑒定，經(jīng)過(guò)動(dòng)物免疫即得到鼠源多抗血清，并采用ELISA方法對(duì)其進(jìn)行鑒定。結(jié)果如下：肟化改造后，肟化物在薄層板上的遷移距離變短了；偶聯(lián)物AFM1BSA在274nm處出現(xiàn)最大吸收峰，且與BSA和AFM1的紫外吸收峰都不重合；AFM1BSA的泳動(dòng)速度明顯小于BSA；免疫的3

5、只小鼠效價(jià)均達(dá)到了在1104左右，其中3號(hào)小鼠所產(chǎn)生的多抗血清的敏感性最好，半數(shù)抑制濃度IC50為133.8ngmL。2.制備抗AFM1單克隆抗體并建立免疫學(xué)的定量檢測(cè)方法本次試驗(yàn)是在AFM1鼠源多抗的基礎(chǔ)上，運(yùn)用細(xì)胞融合技術(shù)、雜交瘤技術(shù)等成功得到了AFM1mAb，并對(duì)其親和力、敏感性和特異性等方面都進(jìn)行了鑒定，得到了較好的結(jié)果。本次實(shí)驗(yàn)成功篩選出兩株細(xì)胞，2C4E3和2C6F2，經(jīng)過(guò)ELISA測(cè)定，上清效價(jià)分別為1:1.28103和1