酶法降低β-乳球蛋白含量的研究.pdf

1、本研究以本實驗室自制的β-乳球蛋白為原料，以β-乳球蛋白改性及降低β-乳球蛋白含量為目標，優(yōu)化了一種降解β-乳球蛋白的工藝，建立了一種針對檢測乳清小肽類物質(zhì)的凝膠電泳檢測方法，并通過該方法對β-乳球蛋白降解產(chǎn)生的分子量在10kD及以下的小肽進行了定性檢測，研究共分三部分。
　　 試驗一，由于聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)在蛋白質(zhì)分析中，對小分子質(zhì)量多肽類樣品分析效果不佳，針對該技術(shù)在小分子乳清肽方面的實際應(yīng)用，比較了不同濃度的濃縮膠、分

2、離膠，控制電泳過程中的電壓電流，以及研究不同染色方法的差異。最后優(yōu)化建立了一種可用于快速檢測10kD及以下的小肽的Tricine-SDS-PAGE方法。
　　 試驗二，針對β-乳球蛋白耐蛋白酶水解，單酶對其水解能力有限，水解度不高的問題，研究了堿性蛋白酶分別與木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶組合對β-乳球蛋白進行雙酶解，以水解度(DH)和可溶性氮含量(TCA-SN)表征其反應(yīng)程度，確定堿性蛋白酶與木瓜蛋白酶為最佳酶解組合。通過正

3、交實驗，確定組合最佳反應(yīng)條件為：酶活添加量為5310U/g的堿性蛋白酶先水解150min后，再加入酶活添加量為4500U/g的木瓜蛋白酶，反應(yīng)到180min時，水解度可達36.21％。結(jié)合論文第一章的Tricine-SDS-PAGE方法對β-乳球蛋白水解液進行電泳分析，了解其降解規(guī)律。
　　 試驗三，目前β-乳球蛋白改性技術(shù)鮮有聯(lián)合使用，本研究嘗試采用熱處理與試驗二中摸索出的雙酶解反應(yīng)相結(jié)合，兩種改性技術(shù)聯(lián)合使用。先通過單因素實