β—乳球蛋白源ACE抑制活性肽的研究.pdf

1、用蛋白的濃度與純度為指標，比較研究了硫酸銨沉淀加凝膠層析法和高鹽低pH條件下透析法兩種技術(shù)路線分離純化β-乳球蛋白的效果；以β-乳球蛋白水解后的ACE抑制率為指標，對胰蛋白酶酶解β-乳球蛋白的條件進行優(yōu)化；用陽離子交換樹脂和大孔樹脂DA201-C對β-乳球蛋白的胰蛋白酶酶解液進行脫鹽處理，并選用Sephadex G-25和Sephadex G-15串聯(lián)分離得β-乳球蛋白源ACE抑制肽。
　　 1．硫酸銨沉淀加凝膠層析法分離β-乳

2、球蛋白。以乳清粉為原料，用70％硫酸銨沉淀初步分離乳清蛋白，再選用SephadexG-50凝膠層析柱在pH6.8的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液條件下以1.0rpm的洗脫速度洗脫收集目標峰。結(jié)果表明：硫酸銨沉淀加凝膠層析法所得β-乳球蛋白濃度為1mg/ml、純度>90％。
　　 2．高鹽低pH條件下透析法分離β-乳球蛋白。以乳清粉為原料，選用7％的NaCl在pH為2的條件下初步沉淀分離乳清蛋白，再用高速離心機在10000×g重力下

3、離心分離20min，最后用分子截量為14000Da的透析袋放于30倍體積的蒸餾水中靜置20小時，收集透析袋中的溶液。結(jié)果表明：高鹽低pH條件下透析法所得β-乳球蛋白濃度為11mg/ml、純度達90％左右。
　　 3．制備β-乳球蛋白源ACE抑制生物活性肽的酶解方式和條件優(yōu)化。采用胰蛋白酶，中性蛋白酶，胃蛋白酶水解β-乳球蛋白制備ACE抑制肽，通過體外檢測法測定其ACE抑制率。結(jié)果表明，胰蛋白酶水解物的ACE抑制率最大。采用三因素

4、二次旋轉(zhuǎn)正交試驗對胰蛋白酶水解β-乳球蛋白的水解條件進行優(yōu)化，研究了底物濃度、溫度、酶與底物的質(zhì)量比對ACE抑制率的影響，建立了回歸方程：Y=50.62-2.33X1-1.97X2+5.81X3-3.36X2X3-6.56X22-1.96X32，分析了各因素對ACE抑制率的影響，確定了最優(yōu)的水解條件為：水解溫度40℃，底物質(zhì)量濃度為60g/L，酶與底物的質(zhì)量比為3％。在胰蛋白酶最優(yōu)的水解條件下酶解，水解6h時水解物ACE抑制率最大。

5、r>　　 4．β-乳球蛋白源ACE抑制生物活性肽的分離純化。試驗首先選擇陽離子交換樹脂和大孔樹脂DA201-C對具有較高ACE抑制活性的β-乳球蛋白源活性肽進行脫鹽。結(jié)果表明：陽離子交換樹脂脫鹽率86.67％，大孔樹脂DA201-C脫鹽率83.33％。但大孔樹脂DA201-C脫鹽處理后的水解物ACE抑制活性提高了約50％。因此，大孔樹脂DA201-C為β-乳球蛋白水解物比較理想的脫鹽方法：選擇具有分子篩作用的Sephadex G-25