血管性癡呆大鼠7B2、PC2在海馬區(qū)的表達(dá)及苯酞干預(yù)的影響研究.pdf

1、目的:
　　 本研究建立在Wistar大鼠血管性癡呆的模型基礎(chǔ)上，結(jié)合病理、行為學(xué)、分子生物學(xué)和藥物干預(yù)等方面，檢測在血管性癡呆大鼠海馬中7B2、PC2的表達(dá)變化，觀察丁苯酞對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力以及海馬中7B2、PC2表達(dá)的影響，探討丁苯酞對血管性癡呆的可能的治療新機制。
　　 方法:
　　 12-14周齡的健康雄性Wistar大鼠80只，體重約250g-300g，隨機分為3組:假手術(shù)組(n=16)，血管

2、性癡呆模型組(n=32)，丁苯酞干預(yù)組(n=32)。根據(jù)造模后3天(3d)、1周(1w)、2周(2w)、4周(4w)四個不同的時間點將血管性癡呆模型組、丁苯酞干預(yù)組隨機分為四個亞組，每個亞組8只。以雙側(cè)頸動脈永久結(jié)扎法（2-VO法）制作血管性癡呆模型，分離大鼠雙側(cè)頸動脈，假手術(shù)組只分離不結(jié)扎，模型組、丁苯酞干預(yù)組永久結(jié)扎雙側(cè)頸動脈。丁苯酞干預(yù)組于手術(shù)當(dāng)日起即灌胃相應(yīng)劑量的丁苯酞，模型組灌注等量的生理鹽水，假手術(shù)組不給藥。采用HE染色觀察

3、病理學(xué)變化;應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測7B2、PC2免疫陽性細(xì)胞表達(dá)水平的動態(tài)變化，利用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測海馬組織中7B2mRNA、PC2mRNA的表達(dá)。假手術(shù)組、模型組4周亞組、丁苯酞干預(yù)組4周亞組大鼠于手術(shù)后第24天開始行Morris水迷宮試驗，測試學(xué)習(xí)記憶能力，手術(shù)后第28天處死大鼠。數(shù)據(jù)以均數(shù)(±)標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.Mor

4、ris水迷宮試驗
　　 假手術(shù)組、模型組4周亞組、丁苯酞干預(yù)組4周亞組大鼠于術(shù)后第24、25、26、27天分別測試Morris水迷宮定位航行試驗，以逃避潛伏期作為學(xué)習(xí)成績，于術(shù)后28天行空間探索試驗，以穿越平臺次數(shù)作為記憶成績。
　　 模型組大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力均下降，具體表現(xiàn)為逃避潛伏期的時間明顯延長，分別為(87.23±4.69，71.32±5.35，42.55±4.26，39.76±3.47)秒，穿越目標(biāo)平臺的次數(shù)

5、最少，為(4.45±1.63)次。假手術(shù)組大鼠逃避潛伏期最短，分別為(50.22±7.27，31.45±4.23，18.73±4.51，11.34±2.18)秒，穿越目標(biāo)平臺的次數(shù)最多，為(8.64±1.52)次。丁苯酞干預(yù)組居中，逃避潛伏期分別為(62.32±3.16，42.54±4.83，32.34±5.82，19.94±3.51)秒，穿越目標(biāo)平臺的次數(shù)為(6.98±1.45)次。定位航行試驗:模型組逃避潛伏期較假手術(shù)組明顯延長，差

6、異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），丁苯酞干預(yù)組較模型組逃避潛伏期縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);空間探索試驗:模型組穿越平臺所在位置的次數(shù)明顯少于假手術(shù)組及丁苯酞干預(yù)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 2.病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 假手術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，排列緊密，細(xì)胞核圓而大，核仁清晰，與周圍神經(jīng)元界限清楚，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元排列紊亂、稀疏，神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，

7、細(xì)胞水腫明顯，細(xì)胞核固縮、深染，結(jié)構(gòu)不清;丁苯酞干預(yù)組神經(jīng)元數(shù)量較多，排列尚規(guī)則，無明顯水腫帶，細(xì)胞核較圓，核仁清晰，僅見少量固縮變性的神經(jīng)元，結(jié)構(gòu)較清晰。
　　 3.免疫組織化學(xué)結(jié)果
　　 7B2在假手術(shù)組海馬CA1區(qū)可見明顯表達(dá)，模型組3天亞組、1周亞組、2周亞組、4周亞組7B2蛋白的表達(dá)水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達(dá)水平最低。模型組各亞組7B2的表達(dá)與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;丁苯酞干

8、預(yù)組各亞組海馬CA1區(qū)7B2蛋白的表達(dá)量明顯高于模型組各亞組相應(yīng)數(shù)值(P＜0.05)，7B2表達(dá)的趨勢與模型組大致相同。
　　 PC2在假手術(shù)組海馬CA1區(qū)可見明顯表達(dá)，與假手術(shù)組相比較，血管性癡呆模型3天亞組PC2表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），之后呈下降趨勢，1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2蛋白的表達(dá)水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達(dá)水平最低。模型組1周亞組、2周亞組、4周亞組與假手術(shù)組相比，差

9、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);丁苯酞干預(yù)組3天亞組與模型組3天亞組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。丁苯酞干預(yù)組1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2蛋白的表達(dá)量明顯高于模型組各時間點相應(yīng)數(shù)值（P＜0.05），PC2表達(dá)的趨勢與模型組大致相同。
　　 4.RT-PCR檢測結(jié)果
　　 假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)可見明顯7B2mRNA的表達(dá)。模型組3天亞組、1周亞組、2周亞組、4周亞組7B2mRNA表達(dá)水平明顯減低，其中以

10、模型組2周亞組表達(dá)水平最低。各亞組與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;而丁苯酞干預(yù)組各亞組較相應(yīng)模型組各亞組7B2mRNA的表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。
　　 假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)PC2mRNA可見明顯表達(dá)，模型組3天亞組較假手術(shù)組表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。模型組1周亞組、2周亞組、4周亞組PC2mRNA表達(dá)水平明顯減低，其中以模型組2周亞組表達(dá)水平最低。模型組1周亞組、2周亞組

11、、4周亞組與假手術(shù)組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;丁苯酞干預(yù)組3天亞組與模型組3天亞組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而丁苯酞干預(yù)組1周亞組、2周亞組、4周亞組較相應(yīng)模型組各亞組PC2mRNA的表達(dá)明顯增加（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元7B2、PC2的表達(dá)明顯減少。
　　 2.丁苯酞可能是通過誘導(dǎo)血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元7B2表達(dá)的上調(diào)，進而上調(diào)PC2的表達(dá)