丁苯酞對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能的影響及Akt-Nrf2信號(hào)通路和NOX1蛋白的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：血管性認(rèn)知功能障礙（vascularcognitiveimpairment，VCI）的晚期階段被稱作血管性癡呆（vasculardementia，VD）。隨著人口老齡化加劇、生活及醫(yī)療水平的提高，老年人比例逐漸增加，VD作為老年人群常見疾病給家庭、社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。因此，更好的了解VD的發(fā)病機(jī)制，可以為臨床治療提供更好且有效的治療思路。
　　許多研究表明，慢性腦低灌注（chroniccerebralhypoperfusi

2、on，CCH）相關(guān)的氧化應(yīng)激損傷在VCI的發(fā)病過程中起了重要的作用。而核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子2(Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2，Nrf2)-抗氧化反應(yīng)元件（AntioxidantResponseElement，ARE）通路是體內(nèi)非常重要的對(duì)抗氧化應(yīng)激損傷的通路之一。本課題組擬通過雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎術(shù)（bilateralcommoncarotidarteryocclusion，BCCAO）制備VD

3、大鼠模型，觀察丁苯酞（dl-3n-butylphthalide，NBP）是否能改善VD大鼠的認(rèn)知功能，并探討其作用機(jī)制是否與調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白NOX1表達(dá)及激活A(yù)kt/Nrf2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)。
　　方法：
　　選取3月齡的雄性清潔級(jí)Sprague-Dawley(SD)大鼠為研究對(duì)象，體重約250-300g，隨機(jī)將其分為4組，即假手術(shù)組（sham組），模型組（vehicle組），NBP低劑量組（NBP-L），NBP高劑量組

4、（NBP-H）。采用BCCAO法制備VD大鼠模型，BCCAO術(shù)后次日開始進(jìn)行干預(yù)。假手術(shù)組和模型組給予等體積玉米油；NBP低劑量組和NBP高劑量組分別給予40mg/kg和80mg/kg灌胃治療，連續(xù)干預(yù)28天。
　　4周后，采用Morris水迷宮進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試：定位航行實(shí)驗(yàn)（placenavigationtest）測(cè)試大鼠的空間學(xué)習(xí)能力，空間探索實(shí)驗(yàn)（spatialprobetest）測(cè)試大鼠的記憶能力。行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，應(yīng)用HE

5、染色觀察各組大鼠海馬組織的病理學(xué)變化，采用Westernblot方法觀察t-akt、p-akt、t-Nrf2、n-Nrf2、HO-1、NOX-1、Bcl-2、Bax蛋白及免疫組化方法觀察HO-1蛋白的變化。
　　結(jié)果：
　　1、水迷宮行為學(xué)測(cè)試結(jié)果
　　1.1定位航行實(shí)驗(yàn)：隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，各組大鼠的尋臺(tái)時(shí)間，即逃避潛伏期逐漸縮短。與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（P<0.01）。經(jīng)丁苯酞干預(yù)后，N

6、BP治療組與模型組相比，大鼠的逃避潛伏期明顯縮短（P<0.01）。
　　1.2空間探索實(shí)驗(yàn)：與假手術(shù)組相比較，VD模型組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比顯著下降（P<0.01）。經(jīng)丁苯酞干預(yù)后，與模型組相比，治療組大鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比均有所升高（P<0.01）。
　　2、HE染色結(jié)果：
　　假手術(shù)組大鼠海馬CA1區(qū)的錐體神經(jīng)元排列致密、整齊，無明顯的神經(jīng)元丟失現(xiàn)象，神經(jīng)元大小正常、形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，且核仁清晰，胞漿清亮

7、；與假手術(shù)相比，VD模型組神經(jīng)元明顯的丟失，且神經(jīng)元排列疏松紊亂、形態(tài)不規(guī)則，胞核濃染固縮；胞質(zhì)呈嗜酸性。而經(jīng)過丁苯酞干預(yù)后，上述形態(tài)學(xué)變化有所改善。大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元缺失減少，但仍可見少量的核固縮。
　　3、WesternBlot結(jié)果
　　3.1丁苯酞對(duì)VD大鼠海馬Akt/Nrf2信號(hào)通路的作用
　　四組之間的t-akt蛋白表達(dá)水平?jīng)]有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠海馬組織p-ak

8、t、totalNrf2、nuclearNrf2、HO-1蛋白表達(dá)明顯下降（P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.01））；
　　而經(jīng)丁苯酞治療后，與模型組相比，NBP-L和NBP-H組大鼠海馬p-akt蛋白水平均顯著升高（P<0.05，P<0.01）；治療組t-Nrf2、n-Nrf2蛋白水平均顯著升高（P<0.01，P<0.01）；NBP-L和NBP-H組的HO-1蛋白水平均表達(dá)增加（P<0.05，P<0.01）；但高

9、低劑量組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　3.2丁苯酞對(duì)VD大鼠海馬NOX-1蛋白表達(dá)的影響
　　與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠海馬組織NOX1蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.01）。經(jīng)丁苯酞干預(yù)后，與模型組相比，NBP-L和NBP-H組大鼠海馬組織NOX1蛋白水平均表達(dá)下降（P<0.01，P<0.01），并且高劑量組NOX1蛋白下降更顯著（P<0.05）。
　　3.3丁苯酞對(duì)VD大鼠海馬Bcl-2、Bax蛋白表

10、達(dá)的影響
　　與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠海馬中Bcl-2蛋白顯著下降（P<0.01）而Bax蛋白顯著升高（P<0.05），因此Bcl-2/Bax比值明顯降低（P<0.01）；經(jīng)丁苯酞干預(yù)后，上述變化得到明顯逆轉(zhuǎn)（P<0.01，P<0.01，P<0.01），而NBP-L和NBP-H組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4、免疫組化結(jié)果
　　與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元HO-1免疫陽性表達(dá)明顯