皮膚圓錐體結(jié)構(gòu)損傷致增生性瘢痕的實驗研究.pdf

1、[目的]
　　 從病理學(xué)、免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)多方面研究皮膚圓錐體結(jié)構(gòu)(conicalstructure，CS)損傷與增生性瘢痕(hypertrophic scar，HS)形成之間的關(guān)系。利用激光捕獲顯微切割(laser capture microdissection，LCM)技術(shù)將HS的研究精確定位到CS，探討CS在HS形成中的分子學(xué)作用，從皮膚微觀結(jié)構(gòu)探討HS形成的病因?qū)W及其機(jī)制，為HS形成提供新的理論依據(jù)，同時進(jìn)一步證

2、明雌性杜洛克豬(the female，red Duroc pig，F(xiàn)RDP)是HS的良好動物模型(animal model，AM)。
　　 [方法]
　　 分別在兩只FRDP背部制造8個創(chuàng)面，共16個創(chuàng)面，分成4組：0.038cm組、0.076cm組、0.114cm組、0.152cm組，每組4個創(chuàng)面，每個創(chuàng)面為7.0cm×7.0cm。將深度為0.038cm、0.076cm的創(chuàng)面視為淺創(chuàng)面，將深度為0.114cm、0.15

3、2cm的創(chuàng)面視為深創(chuàng)面。組織標(biāo)本在傷后0天、10天、30天、60天、90天、150天獲取。從臨床角度結(jié)合病理學(xué)技術(shù)觀察創(chuàng)面愈合與HS形成過程；利用免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本中轉(zhuǎn)化生長因子β-1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1，IGF-1)的表達(dá)，比較創(chuàng)面愈合過程中兩生長因子在CS、CS旁組織、瘢痕和瘢痕旁皮膚中的表達(dá)結(jié)

4、果，并與正常皮膚中的表達(dá)結(jié)果相比較；利用LCM分離出正常皮膚的中CS、CS旁組織以及創(chuàng)面愈合過程中CS、CS旁組織，當(dāng)深創(chuàng)面CS完全消失后，取瘢痕及瘢痕旁皮膚。用RT-PCR法測定分離后標(biāo)本中TGF-β1 mRNA、IGF-1mRNA的表達(dá)水平，比較在創(chuàng)面愈合過程中不同標(biāo)本中TGF-β1 mRNA、IGF-1mRNA表達(dá)結(jié)果，同時與正常皮膚中的表達(dá)結(jié)果相比較。并將最終結(jié)果與文獻(xiàn)報道的人體HS中兩種生長因子的表達(dá)情況進(jìn)行比較。
　　

5、 [結(jié)果]
　　 1.大體及鏡下觀察結(jié)果淺創(chuàng)面組：CS上半部損傷，創(chuàng)面于傷后3周內(nèi)愈合，愈合的創(chuàng)面較為平整，毛發(fā)完好，無瘢痕形成，傷后150d創(chuàng)面組織學(xué)結(jié)構(gòu)與正常皮膚相似，CS完好；與正常皮膚厚度相比較，組織塊厚度無明顯變化，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。深創(chuàng)面組：CS下半部損傷，創(chuàng)面于傷后4周以后愈合，愈合的創(chuàng)面粗糙、不平整，較厚、隆起，無毛發(fā)，攣縮，質(zhì)地堅硬，局部色素脫失或加深，傷后60天始CS逐漸消失，被大量紊亂的膠

6、原纖維束充填；與正常皮膚厚度相比較，組織塊明顯增厚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與淺創(chuàng)面組組織塊厚度相比較，組織塊明顯增厚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.免疫組織化學(xué)結(jié)果淺創(chuàng)面組：未能檢測到。TGF-β1的表達(dá)。傷后10天，IGF-1表達(dá)稍有增高；與正常皮膚和CS旁組織相比較，在CS中的表達(dá)更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，30天后IGF-1的表達(dá)恢復(fù)到正常皮膚表達(dá)水平。深創(chuàng)面組：傷后檢測到TGF-β

7、1的表達(dá)；與CS旁組織相比較，在CS中的表達(dá)更高；與瘢痕旁皮膚相比較，瘢痕中的表達(dá)更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。傷后IGF-1有較高的表達(dá)；與正常皮膚和CS旁組織相比較，CS中表達(dá)更高；與正常皮膚和瘢痕旁皮膚相比較，瘢痕中表達(dá)更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.RT-PCR結(jié)果淺創(chuàng)面組：傷后10天、30天，CS和CS旁組織中TGF-β1mRNA、IGF-1mRNA的表達(dá)均較正常皮膚中的表達(dá)增高；與CS旁

8、組織相比較，CS中的表達(dá)更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。隨后，CS和CS旁組織中TGF-β1mRNA、IGF-1mRNA的表達(dá)恢復(fù)到正常皮膚水平。深創(chuàng)面組：傷后10-30天，CS和CS旁組織中TGF-β1 mRNA、IGF-1mRNA的表達(dá)明顯升高；與正常皮膚和CS旁組織相比較，CS中升高更明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。傷后60-150天，瘢痕中TGF-β1mRNA的表達(dá)高于正常皮膚和瘢痕旁皮膚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<

9、0.05)。傷后90天，瘢痕和瘢痕旁皮膚中IGF-1mRNA的表達(dá)可見再次升高，但低于傷后開始階段。傷后150天，瘢痕和瘢痕旁皮膚中IGF-1mRNA的表達(dá)降至最低，但仍高于正常皮膚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 FRDP背部深創(chuàng)面會產(chǎn)生與人體HS在組織學(xué)和生物學(xué)上相似的瘢痕組織。在淺創(chuàng)面組CS上半部受損，完全再生愈合；深創(chuàng)面組CS下半部受損，CS消失，被大量紊亂的膠原纖維束充填。CS在HS形