齊墩果酸治療皮膚增生性瘢痕的作用機(jī)制研究.pdf

1、增生性瘢痕是皮膚創(chuàng)傷愈合后瘢痕持續(xù)增生的一種病理現(xiàn)象,是病理性瘢痕的一種。它的形成與纖維細(xì)胞的異常增生、膠原的過度生成和細(xì)胞外基質(zhì)過度沉淀有關(guān),常見于深度燒傷,炎癥和外傷等的創(chuàng)傷后修復(fù)。增生性瘢痕以紅腫、明顯高出于皮膚和病變皮膚瘙癢扭曲,并伴隨著攣縮為特點。壓迫感、僵硬感、關(guān)節(jié)靈活性喪失和變形常使病變部位瘙癢疼痛,并有一系列的功能障礙和影響美觀。對于瘢痕的治療目前有許多手段,但尚未有一種方法能夠完全有效且永久有效而無副作用,而天然藥物在

2、許多疾病的治療中的重要作用己被廣泛接受。
　　 本研究采用組織培養(yǎng)的方法分離出瘢痕成纖維細(xì)胞,通過MTT測定細(xì)胞的活力并計算其增殖抑制率。通過流式細(xì)胞儀測定成纖維細(xì)胞的凋亡作用,AV/PI雙染用于測定細(xì)胞的凋亡率,PI檢測DNA含量,DCFH-DA測定細(xì)胞ROS水平,羅丹明123測定線粒體膜電位。用蛋白質(zhì)印跡法檢測成纖維細(xì)胞的凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的磷酸化p38MAPK和磷酸化JNK蛋白,以及在凋亡中起關(guān)鍵作用的蛋白caspase-3

3、和AIF的表達(dá)情況。通過建立兔耳瘢痕模型,從整體動物水平對齊墩果酸的藥效做進(jìn)一步考察。兔耳瘢痕被隨機(jī)分為5組,分別為模型組、低劑量組(2.5％)、中劑量組(5％)、高劑量組(10％)和陽性藥組(contractubax),正常組的兔耳不做任何處理。給藥22天后,檢測瘢痕組織中的Ⅰ型和Ⅲ型膠原、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)的含量,并測定瘢痕增生指數(shù)(SEI)。
　　 實驗結(jié)果表明齊墩果酸能夠抑制瘢痕

4、成纖維細(xì)胞的增殖,并呈劑量和時間依賴性,流式檢測的結(jié)果顯示,齊墩果酸能夠誘導(dǎo)瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡,降低線粒體膜電位,但可能不是通過升高細(xì)胞ROS水平而進(jìn)一步誘發(fā)凋亡。在給予齊墩果酸處理后,蛋白印跡結(jié)果顯示caspase-3和AIF均被激活,磷酸化p38和磷酸化JNK蛋白的表達(dá)均上調(diào)。在兔耳瘢痕模型中,給藥22天后,兔耳瘢痕組織中的TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型膠原的含量都顯著降低,而MMP-1的水平顯著的升高,SEI也明顯的降低,組織切片顯示瘢痕