人心肌肌鈣蛋白I（cTnI）膠體金免疫層析分析法的研究.pdf

　　目前在工業(yè)化國(guó)家，心血管疾病是威脅人類生命的主要疾病之一，發(fā)病率和死亡率均很高，對(duì)此類疾病進(jìn)行早期診斷和治療具有重大意義。心由于人心肌組織難以獲得，因此從組織中大量提取純化cTnI，把它作為研究或者診斷用的抗原是極其困難的，所以本實(shí)驗(yàn)采用Fmoc保護(hù)的氨基酸，用固相法人工合成多肽cTnI抗原，其特點(diǎn)是選擇合成天然cTnI蛋白上的一段氨基酸多肽，具有免疫原性、且水溶性好，經(jīng)高效液相層析純化和質(zhì)譜分析證實(shí)所合成多肽達(dá)到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。同時(shí)為了加強(qiáng)這段多肽的免疫原性，把它和血藍(lán)蛋白(KLH)載體偶聯(lián)，用該連接物免疫家兔，采用經(jīng)典的多克隆抗體制備技術(shù)制備cTnI合成多肽抗體，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)對(duì)cTnI抗體進(jìn)行檢測(cè)，達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。采用檸檬酸三鈉還原法制備金溶膠。用制備的抗體標(biāo)記納米級(jí)的膠體金顆粒和包被微孔硝酸纖維素膜，并結(jié)合層析技術(shù)建立了cTnI的膠體金免疫層析分析法，獲得了滿意的結(jié)果。該方法具有較高的靈敏度和特異性。為急性心肌梗死(AMI)高危人群的普查和醫(yī)院輔助診斷AMI提供特異、靈敏、簡(jiǎn)便、快速的診斷技術(shù)，為制備國(guó)產(chǎn)化cTnI試劑盒奠定了基礎(chǔ)。