基于膠體金免疫層析法的食源性致病菌檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、近年來(lái)，全球及我國(guó)接連不斷發(fā)生的食源性病原微生物引起的食品安全事故頻頻發(fā)生，其中，由大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等致病菌引起的感染最為常見(jiàn)。在診斷方面，目前廣泛使用的食源性病原微生物檢測(cè)方法存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，過(guò)程繁瑣，需要大型儀器來(lái)輔助，不利于現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)，對(duì)操作人員技術(shù)要求高以及對(duì)特定血清型難以分離鑒定的問(wèn)題。因此，建立研究食源性致病菌的快速檢測(cè)方法就顯得尤為重要。膠體金免疫層析法是一種將納米技術(shù)、膠體金標(biāo)記、免疫反應(yīng)和色層分析法等多種方

2、法結(jié)合在一起的固相免疫檢測(cè)技術(shù)，它具有靈敏、便捷、安全、快速、成本低等特點(diǎn)。本課題主要研究基于膠體金免疫層析法的食源性致病菌檢測(cè)技術(shù)。
　　 1)以膠體金免疫層析法為基礎(chǔ)制備金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)卡。本實(shí)驗(yàn)對(duì)檢測(cè)卡制備過(guò)程中的膠體金制備條件、膠體金標(biāo)記的最佳pH值、膠體金標(biāo)記的最適蛋白量、膠體金稀釋液等配方進(jìn)行了探索，闡述了采用膠體金免疫層析法制金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)卡的制備方法;并且對(duì)制得的金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)卡進(jìn)行全面的性

3、能測(cè)驗(yàn)與評(píng)估。測(cè)試結(jié)果表明，該檢測(cè)卡的靈敏度在103 CFU/mL，特異性、重現(xiàn)性良好，檢測(cè)卡在常溫下保質(zhì)期為12個(gè)月，4℃條件下保質(zhì)期為24個(gè)月。
　　 2)金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)卡在檢測(cè)食品中金黃色葡萄球菌的應(yīng)用。人工模擬被金黃色葡萄球菌污染的食品樣品，然后利用上述金黃色葡萄球菌快速檢測(cè)卡檢測(cè);同時(shí)將上述食品樣品用ELISA方法檢測(cè)，其結(jié)果作為對(duì)照，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果估算試紙條的檢出率為98.7％。本實(shí)驗(yàn)制得的金黃色葡萄球菌快速檢

4、測(cè)卡在食品安全檢測(cè)方面有很好的實(shí)用價(jià)值。
　　 3)制備大腸桿菌O157:H7快速檢測(cè)卡。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大腸桿菌O157:H7快速檢測(cè)卡的制備配方進(jìn)行了摸索，闡述了采用膠體金免疫層析法制大腸桿菌O157:H7快速檢測(cè)卡的制備方法;并且對(duì)制得的快速檢測(cè)大腸桿菌O157:H7的膠體金免疫層析試紙條進(jìn)行性能測(cè)驗(yàn)與評(píng)估。測(cè)試結(jié)果表明，該檢測(cè)卡的靈敏度在104 CFU/mL，特異性、重現(xiàn)性良好，檢測(cè)卡在常溫下保質(zhì)期為12個(gè)月，4℃條件下保質(zhì)期為