基于膠體金免疫層析法的食源性致病菌檢測技術(shù)的研究.pdf

1、近年來，全球及我國接連不斷發(fā)生的食源性病原微生物引起的食品安全事故頻頻發(fā)生，其中，由大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等致病菌引起的感染最為常見。在診斷方面，目前廣泛使用的食源性病原微生物檢測方法存在檢測時間長，過程繁瑣，需要大型儀器來輔助，不利于現(xiàn)場的快速檢測，對操作人員技術(shù)要求高以及對特定血清型難以分離鑒定的問題。因此，建立研究食源性致病菌的快速檢測方法就顯得尤為重要。膠體金免疫層析法是一種將納米技術(shù)、膠體金標(biāo)記、免疫反應(yīng)和色層分析法等多種方

2、法結(jié)合在一起的固相免疫檢測技術(shù)，它具有靈敏、便捷、安全、快速、成本低等特點(diǎn)。本課題主要研究基于膠體金免疫層析法的食源性致病菌檢測技術(shù)。
　　 1)以膠體金免疫層析法為基礎(chǔ)制備金黃色葡萄球菌快速檢測卡。本實驗對檢測卡制備過程中的膠體金制備條件、膠體金標(biāo)記的最佳pH值、膠體金標(biāo)記的最適蛋白量、膠體金稀釋液等配方進(jìn)行了探索，闡述了采用膠體金免疫層析法制金黃色葡萄球菌快速檢測卡的制備方法;并且對制得的金黃色葡萄球菌快速檢測卡進(jìn)行全面的性

3、能測驗與評估。測試結(jié)果表明，該檢測卡的靈敏度在103 CFU/mL，特異性、重現(xiàn)性良好，檢測卡在常溫下保質(zhì)期為12個月，4℃條件下保質(zhì)期為24個月。
　　 2)金黃色葡萄球菌快速檢測卡在檢測食品中金黃色葡萄球菌的應(yīng)用。人工模擬被金黃色葡萄球菌污染的食品樣品，然后利用上述金黃色葡萄球菌快速檢測卡檢測;同時將上述食品樣品用ELISA方法檢測，其結(jié)果作為對照，根據(jù)檢測結(jié)果估算試紙條的檢出率為98.7％。本實驗制得的金黃色葡萄球菌快速檢

4、測卡在食品安全檢測方面有很好的實用價值。
　　 3)制備大腸桿菌O157:H7快速檢測卡。本實驗對大腸桿菌O157:H7快速檢測卡的制備配方進(jìn)行了摸索，闡述了采用膠體金免疫層析法制大腸桿菌O157:H7快速檢測卡的制備方法;并且對制得的快速檢測大腸桿菌O157:H7的膠體金免疫層析試紙條進(jìn)行性能測驗與評估。測試結(jié)果表明，該檢測卡的靈敏度在104 CFU/mL，特異性、重現(xiàn)性良好，檢測卡在常溫下保質(zhì)期為12個月，4℃條件下保質(zhì)期為