辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素B-,1-檢測(cè)及應(yīng)用.pdf

1、貴州優(yōu)質(zhì)辣椒具有色澤紅潤(rùn)、油分重、香味濃、辣味適中的特點(diǎn)，是開(kāi)發(fā)辣椒系列制品的極好原料。目前，辣椒調(diào)味品現(xiàn)已成為貴州食品工業(yè)新興產(chǎn)業(yè)，也是貴州出口食品的重要產(chǎn)品，已遠(yuǎn)銷(xiāo)21個(gè)國(guó)家和地區(qū)。但辣椒調(diào)味品中AFBl污染已成為阻礙出口的貿(mào)易壁壘，為了擴(kuò)大辣椒調(diào)味品出口、確保產(chǎn)品質(zhì)量、打破國(guó)外技術(shù)壁壘，發(fā)展貴州經(jīng)濟(jì)，保證食品安全和滿(mǎn)足出口快速檢測(cè)需要，需要建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速、容易普及應(yīng)用的方法來(lái)檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B<,1>(A

2、FB<,1>)。 本文采用ELISA方法檢測(cè)辣椒調(diào)味品中的AFBl，針對(duì)辣椒調(diào)味品成分的復(fù)雜性，預(yù)處理過(guò)程中采用不同有機(jī)溶劑甲醇水溶液配比對(duì)AFB<,1>進(jìn)行提取優(yōu)化，同時(shí)分析樣品中pH、含鹽量和油脂等因素對(duì)ELISA法檢測(cè)AFB<,1>結(jié)果的影響。研究表明，應(yīng)用80％甲醇水溶液提取AFB<,1>，調(diào)整辣椒調(diào)味品pH值在6～8之間，控制辣椒調(diào)味品氯化鈉含量在10％～20％范圍，用石油醚將樣品處理液中油脂提取可以較好消除檢測(cè)干擾。

3、通過(guò)對(duì)ELISA方法定量檢測(cè)AFB<,1>的可行性進(jìn)行系統(tǒng)的研究和驗(yàn)證，建立了ELISA方法評(píng)價(jià)指標(biāo)，確立了ELISA定量分析的質(zhì)控參數(shù)，ELISA分析方法的線性范圍為0.1μg/kg～10μg/kg，相關(guān)系數(shù)為0.9921。向樣品中分別添加1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg3個(gè)濃度水平的AFBl標(biāo)準(zhǔn)品，平均回收率分別為78.25％，90.9％，84.55％，檢測(cè)靈敏度為0.01μg/kg。同時(shí)，應(yīng)用GB/T18979-2003

4、食品中黃曲霉毒素的測(cè)定．免疫親和層析凈化高效液相色譜法與ELISA方法進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，并向樣品中分別添加1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg3個(gè)濃度水平的AFB<,1>標(biāo)準(zhǔn)品，平均回收率為73.37％，88.47％，93.58％；兩種方法質(zhì)控參數(shù)均達(dá)到中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 0001-1995出口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)的基本規(guī)定。應(yīng)用兩種方法對(duì)樣品測(cè)定值進(jìn)行研究分析，擬合回歸方程為：y

5、=0.9803x+0.1294相關(guān)系數(shù)為：0.9786。從回歸方程和相關(guān)系數(shù)中可以得出：ELISA方法和HPLC方法相關(guān)性較好。從而證實(shí)了ELISA方法用于食品分析中的可行性。并對(duì)貴州出入境檢驗(yàn)檢疫局從貴州省辣椒調(diào)味品生產(chǎn)企業(yè)抽取的有代表性辣椒調(diào)味品120件進(jìn)行AFBl的檢驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果表明，油辣椒系列AFB<,1>含量為1.693～3.025μg/kg，糟辣椒系列AFB<,1>含量為0.632～1.079μg/kg，香辣菜系列AFB<,

6、1>含量為0.599～0.956μg/ kg，雞辣椒系列AFBl含量為1.119～1.874μg/kg，風(fēng)味豆豉系列AFB<,1>含量為3.979～6.391μg/kg，肉絲豆豉系列AFBl含量為3.614～4.696μg/kg，辣三丁油辣椒系列AFB<,1>含量為1.917～2.742gg/kg，初步掌握了辣椒調(diào)味品中AFB<,1>污染情況。本文對(duì)ELISA方法檢測(cè)辣椒調(diào)味品中AFB<,1>的不確定度依據(jù)分層建模理論進(jìn)行了評(píng)定。并對(duì)樣

7、品的均勻性以及在稱(chēng)量、提取、凈化和儀器檢測(cè)等過(guò)程中引起的不確定度進(jìn)行了逐層分析，根據(jù)不同類(lèi)型分別評(píng)定，其中稱(chēng)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度2.91×10<'-5>，樣品稀釋準(zhǔn)備的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度6.26×10<'-5>，AFB<,1>標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)帶來(lái)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度1.002×10<'-2>， ELISA實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程的不確定度2.85×10<'-2>，酶標(biāo)儀讀數(shù)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度及數(shù)據(jù)處理帶來(lái)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度均為5×10<'-3>，通過(guò)分步計(jì)算和

8、整體合成，辣椒調(diào)味品測(cè)定合成不確定度為3.17％；在置信水平95％時(shí)，擴(kuò)展不確定度為6.34％；通過(guò)評(píng)定確定了檢測(cè)結(jié)果置信范圍，合理地表征被測(cè)量值的分散性。使附有不確定度說(shuō)明的測(cè)量結(jié)果更加完整并具有一定意義。 本文分析辣椒調(diào)味品中AFB<,1>影響因素，建立了快速、批量檢測(cè)辣椒調(diào)味品中AFB<,1>的方法，同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)估，確定檢測(cè)結(jié)果置信范圍，并對(duì)并對(duì)貴州省貴陽(yáng)市市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的120件辣椒調(diào)味品樣品進(jìn)行AFB<,1