降解黃曲霉毒素B1菌株的篩選及應(yīng)用.pdf

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是由Aspergillus flavus、Aspergillums nomius、．Aspergillus parasiticus等多種真菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其中黃曲霉毒素B1(AFB1)分布范圍最廣且化學(xué)性質(zhì)最穩(wěn)定，具有很強(qiáng)的毒性、致癌性、致突變性和致畸性，對(duì)人類和家畜的健康危害很大。采用微生物或其產(chǎn)生的酶來對(duì)其進(jìn)行脫毒處理?xiàng)l件相對(duì)溫和，不會(huì)破壞產(chǎn)品的品質(zhì)；而且有些還能增加產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。本論

2、文從降解AFB1菌株的分離鑒定、發(fā)酵條件的優(yōu)化、降解機(jī)理初探和活性酶的研究及其應(yīng)用等方面進(jìn)行研究，主要結(jié)果如下： (1)以香豆素為唯-碳源和能源，從近1500株菌中初篩出16株菌，最后復(fù)篩出35-3菌株的降解效果最佳，達(dá)84.2％。結(jié)合形態(tài)特點(diǎn)、生理生化反應(yīng)特征和16S rDNA測(cè)序結(jié)果，在細(xì)菌分類上35-3被初步鑒定為嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas sp．)。本文AFB1降解菌株篩選方法為一個(gè)創(chuàng)新點(diǎn)，另嗜麥

3、芽窄食單胞菌降解AFB1，國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道，本文首次報(bào)道了該菌株的解毒功能。 (2)經(jīng)單因素試驗(yàn)，35-3菌株降解AFB1的最佳碳源為果糖，最佳氮源為胰蛋白胨，添加：MgCl<,2>可以顯著提高35-3降解能力，對(duì)果糖、胰蛋白胨和MgCl<,2>進(jìn)行三元二次同歸正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定了最佳培養(yǎng)基配方比：果糖1.0％、胰蛋白胨1.0％、MgCl<,2> 0.05mol/L。其它最優(yōu)發(fā)酵條件為：起始pH值為7.5，裝液量為25mL/300

4、mL，三角瓶，種子液培養(yǎng)時(shí)間為12h，接種量為5％，控制降解溫度為35℃，搖床轉(zhuǎn)速140r/min，降解時(shí)間為72h。 (3)活性物質(zhì)主要是來自35-3胞外的代謝產(chǎn)物，降解率為80.83％；65％硫酸銨沉淀的酶降解能力最強(qiáng)，該酶的分子量范圍為大于30kDa而小于50kDa；在72hAFB1降解率達(dá)到最大為85.89％；酶反應(yīng)的最適pH為8.0，降解率為89％；在40℃時(shí)活性最高，降解率為90.40％；Mg<'2+>、Cu<2'+

5、>對(duì)酶有激活作用，F(xiàn)e<'2+>對(duì)酶有抑制作用。 (4)活菌制劑在2.56×10<'10>個(gè)/mL劑量以下不會(huì)引起急性毒性反應(yīng)。將35-3的上清液、發(fā)酵液和胞外酶提取液分別進(jìn)行發(fā)霉玉米、飼料和中草藥的降解試驗(yàn)，結(jié)果表明：三者對(duì)發(fā)霉玉米中AFB1的降解率分別為：74.90％、82.60％和65.40％；對(duì)飼料中AFB1的降解率分別為：77.60％、82.50％和71.20‰對(duì)生大黃中AFB1的降解率分別為：73％、78.10％和6