干細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct4在人膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)人膀胱癌EJ細(xì)胞生物學(xué)的影響.pdf

1、目的：觀察干細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct4在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)，并探討Oct4基因沉默對(duì)人膀胱癌EJ細(xì)胞生物學(xué)的影響，探討Oct4基因作為膀胱癌基因治療靶點(diǎn)的可行性和有效性。
　　 方法：
　　 分別用免疫組化和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)74例膀胱癌組織和32例癌旁組織及24例正常膀胱組織病理標(biāo)本中的Oct4表達(dá)；并將人膀胱癌EJ細(xì)胞，常規(guī)分為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。體外化學(xué)合成Oct4基因序列特異性小干

2、擾RNA(siRNA)，脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人膀胱癌細(xì)胞株EJ細(xì)胞；采用RT-PCR和Western印跡方法分別檢測(cè)特異性siRNA 對(duì)Oct4基因在mRNA和蛋白水平上沉默效果；轉(zhuǎn)染后采用MTT 法檢測(cè)siRNA 對(duì)細(xì)胞增殖的作用；AO/EB 熒光染色法檢測(cè)其凋亡情況；用細(xì)胞劃痕和Transwell 試驗(yàn)體外檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力。
　　 結(jié)果：
　　 免疫組化顯示Oct4在膀胱癌組織的

3、表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常膀胱組織，陽性表達(dá)率分別為83.78％、21.87％、0％，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Oct4在膀胱癌不同病理分級(jí)中的陽性表達(dá)率分別為G1組66.67％、G2組87.50％、G3組 100％，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性表達(dá)率為92.3％，79.1％，隨著病理分級(jí)的升高和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn),Oct4表達(dá)水平逐漸升高，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但不同分期的膀胱癌組織中Oct4表達(dá)差

4、異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示Oct4在膀胱癌組織中的表達(dá)是癌旁組織的的2.0倍，是正常膀胱組織的3.41倍，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但不同分期的膀胱癌組織中Oct4表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；成功轉(zhuǎn)染Oct4-siRNA的膀胱癌EJ細(xì)胞,RT-PCR及Western blot分別顯示Oct4mRNA和蛋白表達(dá)在相應(yīng)的癌細(xì)胞中明顯下降；與陰性對(duì)照組比較，細(xì)胞增殖明顯抑制(P<0.05

5、)；同時(shí)細(xì)胞凋亡率增加（52.73％比11.7％）；RNA 干擾組明顯抑制EJ細(xì)胞遷移力和侵襲力(15.34±1.85比63.07±1.73)。
　　 結(jié)論：
　　 Oct4的表達(dá)與膀胱癌的分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)但與臨床分期無關(guān)，Oct4的過高表達(dá)可能在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用；Oct4-siRNA 可以有效地抑制膀胱癌EJ細(xì)胞Oct4基因的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞遷移和侵襲，Oct4-s