CK10、CK13、CK14、CK19在口腔扁平苔蘚中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：口腔扁平苔蘚(oral lichen planus，OLP)是發(fā)生在口腔粘膜的一種常見的慢性炎性疾病，同時(shí)可伴有皮膚損害。OLP病變往往局限于一個(gè)或幾個(gè)部位，最常見的部位為頰粘膜后側(cè)，其次為舌部、牙齦。OLP病損多變，以白色或灰白色網(wǎng)狀條紋最多見(約占4l％左右)，此外也可表現(xiàn)為紅斑、角化、大皰或糜爛等其他損害形式。OLP組織學(xué)上的特點(diǎn)表現(xiàn)為上皮過度角化或過度不全角化，基底細(xì)胞液化變性以及基底膜斷裂和基底膜下T細(xì)胞帶狀浸潤(rùn)。這些表

2、現(xiàn)提示細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)對(duì)基底細(xì)胞的損傷，但OLP病損形成的初始抗原和致病的確切途徑目前仍然不清楚，因此其臨床治療相當(dāng)困難。角質(zhì)細(xì)胞(keratinocyte)是為人們逐漸認(rèn)識(shí)的一種重要免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，而細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)的表達(dá)與上皮角質(zhì)細(xì)胞的增殖分化密切相關(guān)。CK是中間纖維(intermediate filament，IF)家族成員之一，主要在上皮細(xì)胞中表達(dá)。目前發(fā)現(xiàn)的CK至少有20種，人們將它們分別命名為C

3、K1-CK20，并根據(jù)分子量和等電點(diǎn)分Ⅰ型和Ⅱ型。CK對(duì)維持上皮細(xì)胞的形態(tài)和連續(xù)性非常重要，而且它們具有高度的保守性及組織特異性和分化特異性，并與細(xì)胞的分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、遷移、轉(zhuǎn)化和凋亡等生命活動(dòng)息息相關(guān)。CK總是以特異角蛋白對(duì)的形式表達(dá)于不同的上皮，被認(rèn)為是上皮分化的不同類型和階段的分子標(biāo)志：CK5/CK14為基底層標(biāo)志，CK1/CK10為終末分化標(biāo)記，CK4／CK13是分層標(biāo)志，CK14、CK19可為癌前病變的輔助診斷指標(biāo)。由于CK在

4、復(fù)層上皮中表達(dá)的多樣性和廣泛性，目前有關(guān)CK在OLP病損中的研究國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道，國(guó)外也不多見，而且研究結(jié)論不完全一致。系統(tǒng)檢測(cè)OLP病損口腔粘膜和健康人群正常口腔粘膜中常見CK10、CK13、CK14、CK19的異同，明確OLP病變中細(xì)胞角蛋白在表達(dá)類型和分布上的可能改變，分析其改變與OLP的發(fā)生、預(yù)后之間的可能關(guān)系，有利于OLP的治療和預(yù)防，為進(jìn)一步研究OLP的病因，更好的闡述OLP的發(fā)病機(jī)理打下基礎(chǔ)。 方法： 1．標(biāo)

5、本的收集：按照OLP臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)和病理報(bào)告結(jié)果，在門診收集17例頰部OLP患者的活檢標(biāo)本。對(duì)照組7例，取自外科手術(shù)患者手術(shù)切除的正常頰粘膜組織。 2．標(biāo)本的固定：所有的標(biāo)本術(shù)后立即用10％的中性福爾馬林固定24小時(shí)。 3．制做石蠟塊：固定好的標(biāo)本沖洗、脫水、透明、浸蠟、包埋。 4．切片：每個(gè)標(biāo)本5微米連續(xù)切片七張，一張用于常規(guī)HE染色，一張用PBS代替一抗做陰性對(duì)照，其他幾張分別做CK10、CK13、CK14、C

6、K19的免疫組化染色。 5．切片的免疫組化染色：采用抗CK的單克隆抗體(monoclonalantibodies，MAbs)，應(yīng)用SP(streptavidin-peroxidase，鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶)法進(jìn)行CK的免疫組化染色。 6．切片的診斷：HE切片的診斷由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生盲法讀片確認(rèn)。免疫組化切片的診斷在參照陽(yáng)性對(duì)照切片結(jié)果，在排除邊緣效應(yīng)、非特異染色等干擾因素的基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)切片上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)

7、棕黃色顆粒，判斷為陽(yáng)性細(xì)胞，否則為陰性。 7．結(jié)果計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)口腔粘膜上皮的特點(diǎn)及單抗的特異性，根據(jù)細(xì)胞染色的強(qiáng)度和著色細(xì)胞所占的比例進(jìn)行綜合評(píng)分。 8．統(tǒng)計(jì)分析：采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，非參數(shù)等級(jí)資料的兩樣本比較用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1．在正常非角化頰粘膜上皮中CK10通常無(wú)表達(dá)，或基底上層個(gè)別細(xì)胞表達(dá)，在正常不全角化的頰粘膜上皮中CK10通常表達(dá)于基

8、底上層，陽(yáng)性細(xì)胞趨向表層，為弱表達(dá)或中等強(qiáng)度的表達(dá)；在OLP的病變上皮中CK10的表達(dá)強(qiáng)度較正常組不同程度的增強(qiáng)，為中等強(qiáng)度表達(dá)或強(qiáng)表達(dá)，同時(shí)表達(dá)范圍也有所增寬，有時(shí)可表達(dá)于整個(gè)基底上層，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析P<0.05，證明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：雖然OLP中CK10的表達(dá)隨著上皮角化程度的增加表達(dá)強(qiáng)度有所增強(qiáng)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析P>0.05，差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2．在正常非角化頰粘膜上皮中CK13通常表達(dá)于基底上層，主要集中于棘細(xì)胞層和顆粒層

9、，為中等強(qiáng)度的表達(dá)或強(qiáng)表達(dá)：與前者相比在正常不全角化的頰粘膜上皮中CK13表達(dá)強(qiáng)度降低，一般為弱表達(dá)，表達(dá)范圍也不同程度的縮??；在頰部OLP病變上皮中CK13的表達(dá)較正常組不同程度的減弱，主要表達(dá)于基底上層的棘細(xì)胞中，有時(shí)甚至無(wú)表達(dá)，與正常對(duì)照組比較P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；雖然OLP中CK13的表達(dá)與上皮的角化程度有一定的關(guān)系，角化越強(qiáng)表達(dá)越弱，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析P>0.05，差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．在正常非角化的頰粘膜上

10、皮中CK14通常集中表達(dá)于基底層，偶爾可以擴(kuò)散至基底上淺層，一般為中等強(qiáng)度或強(qiáng)表達(dá)；與前者比較在不全角化粘膜中CK14的表達(dá)不同程度的增強(qiáng)；在頰部0LP的病變上皮中CK14的表達(dá)強(qiáng)度較正常組不同程度的增強(qiáng)，尤其表達(dá)范圍增寬，有時(shí)甚至可以上皮全程表達(dá)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析P<0.05，證明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；雖然OLP中CK14的表達(dá)與上皮的角化程度有一定的關(guān)系，角化越強(qiáng)表達(dá)越強(qiáng)，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析P>0.05，差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.CK19

11、主要表達(dá)于單層上皮，在正常頰粘膜的復(fù)層上皮的中表達(dá)陰性，同樣在頰部OLP病損的復(fù)層上皮中亦未見CK19表達(dá)。 結(jié)論： 1.OLP中伴隨著CK10、CK14的過度表達(dá)，出現(xiàn)CK13表達(dá)下調(diào)，而CK19表達(dá)陰性。 2．OLP中CK10、CK14的過度表達(dá)及CK13的表達(dá)下調(diào)分別與OLP的異常角化、增殖和分化有關(guān)，這也許是機(jī)體的一種防御反應(yīng)，但同時(shí)也提示OLP存在惡性轉(zhuǎn)變的可能，而其癌變潛能的大小尚有待進(jìn)一步研究。