CK19和抑癌基因PTEN在口腔鱗癌中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常見的口腔惡性腫瘤,其發(fā)病率占口腔癌的80％,且近來發(fā)病率有上升的趨勢(shì)。口腔鱗癌的惡性程度高,而且難以早期及時(shí)發(fā)現(xiàn),容易延誤治療時(shí)機(jī),從而影響預(yù)后。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)腫瘤診斷的新手段,對(duì)于早期診斷有著獨(dú)特的作用,成為了腫瘤學(xué)中引人注目的新領(lǐng)域,它反映了癌的發(fā)生、發(fā)展過程及腫瘤相關(guān)基因的激活或失活程度。有研究表明,選擇一些特異性

2、較高的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)某一腫瘤,要優(yōu)于單一指標(biāo)的診斷。細(xì)胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)為Ⅰ型角蛋白,主要表達(dá)于單層上皮的上皮細(xì)胞,也散在表達(dá)于復(fù)層鱗狀上皮的基底細(xì)胞,癌組織中CK19的異常表達(dá)可作為癌的輔助診斷和鑒別診斷指標(biāo)。CK19在口腔黏膜癌變過程中隨病變程度加重其表達(dá)增加,可作為診斷OSCC分化程度的輔助指標(biāo)。抑癌基因 PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted

3、onchromosome ten.第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因),該基因的突變失活與人類多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),是第一個(gè)具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,并與組織學(xué)類型、病理分級(jí)有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SP法檢測(cè)CK19和PTEN在不同類型口腔鱗癌(包括癌及癌旁組織)中的表達(dá),分析CK19和PTEN在鱗癌組織中的表達(dá),以探討CK19和PTEN在口腔鱗癌發(fā)病機(jī)制中的意義,以期為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　

4、方法:收集我院口腔鱗癌患者手術(shù)切除癌組織標(biāo)本20例,年齡36—78歲,平均年齡56.25±11.60歲,術(shù)前未接受放、化療。按照WHO口腔鱗癌組織分型標(biāo)準(zhǔn)(Ⅰ、Ⅱ～Ⅲ級(jí),即高、中、低分化),并切取相應(yīng)的癌旁組織20例；對(duì)照組(無全身系統(tǒng)性疾病,排除可能干擾本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的口腔疾患)15例,為唇裂修補(bǔ)術(shù)中切除的多余唇組織、口腔外傷患者修整創(chuàng)緣的唇頰部黏膜組織或拔除阻生牙時(shí)切除的覆蓋阻生牙牙齦組織,年齡3月-67歲,平均年齡56.23歲,組織用

5、4％的中性甲醛固定液固定24小時(shí),石蠟包埋,做4um厚的連續(xù)切片。用兔抗人CK19多克隆抗體以及兔抗人PTEN多克隆抗體,采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(SP法)進(jìn)行免疫組化染色。CK19以細(xì)胞核或細(xì)胞漿中出現(xiàn)明顯的黃色或者棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色:-:陰性；±:陽(yáng)性細(xì)胞在基底層或占基底上層的25％以下；+:陽(yáng)性細(xì)胞占基底上層的25％～50％；++:陽(yáng)性細(xì)胞占基底上層的50％～75％；+++:陽(yáng)性細(xì)胞占基底上層的75％以上。PTE

6、N表達(dá)的陽(yáng)性部位在細(xì)胞核或者胞漿,按每張切片選取5個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。計(jì)算各個(gè)視野中的陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分率作為該陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。將陽(yáng)性細(xì)胞的比例分為5級(jí):陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5％為0分；6％～25％為1分；26％～50％為2分；51％～75％為3分；>75％為4分。陽(yáng)性強(qiáng)度分為4級(jí):不著色為0分；黃色為1分；棕黃色為2分；黃褐色為3分。兩項(xiàng)得分相乘,按照分?jǐn)?shù)分為4個(gè)等級(jí),即0～1分為(-),2～4分為(+),5～8分為(++

7、),9分以上為(+++)。最后做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,得出結(jié)論。所有分析均使用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。結(jié)果:1.在口腔正常組織、癌旁組織和 OSCC中 CK19陽(yáng)性率分別為13.33％(2/15)、50.00％(10/20)、85.00％(17/20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=20.9 P<0.05)。在口腔正常組織、癌旁組織和OSCC中PTEN陽(yáng)性率分別為100％(15/15)、70％(14/20)、35％(7/20),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X

8、2=11 P<0.05)。2.CK19的表達(dá)強(qiáng)度在正?？谇唤M織、癌旁組織和OSCC中表達(dá)逐漸增高,其中正常組織與癌旁組織(X2=5.12 P<0.05),癌旁組織與癌組織(X2=5.58 P<0.05),正常組織與癌組織(X2=15.21 P<0.05)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在口腔正常組織、癌旁組織和OSCC中PTEN陽(yáng)性率分別為100％(15/15)、70％(14/20)、35％(7/20),其中正常組織與癌組織(X2=5.43 P<0

9、.05),癌旁組織與癌組織(X2=4.91P<0.05),正常組織與癌組織(X2=13.30 P<0.05)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,不表達(dá)或者低表達(dá)見于分化程度差的低分化惡性腫瘤。3.CK19的表達(dá)與OSCC臨床病理學(xué)分級(jí)(X2=4.3 P<0.05)及TNM分期(X2=6.5 P<0.05)有關(guān),與年齡、性別及腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。PTEN的表達(dá)與OSCC臨床病理學(xué)分級(jí)(X2=7.21 P<0.05)有關(guān),而與TNM分期無關(guān)、年齡

10、、性別及腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。4.CK19隨 OSCC分化程度降低表達(dá)逐漸增高,PTEN隨OSCC分化程度降低表達(dá)逐漸減少,兩者呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1.CK19和抑癌基因PTEN表達(dá)異?？赡苁强谇击[癌產(chǎn)生的機(jī)制之一,與口腔鱗癌的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)。2.CK19的表達(dá)增加及PTEN的表達(dá)減少或缺失與口腔鱗癌的組織病理學(xué)分級(jí)有關(guān)。3.CK19的表達(dá)異常與口腔鱗癌。TNM分期有關(guān),而抑癌基因PTEN的表達(dá)異常與