CK19和抑癌基因PTEN在口腔鱗癌中的表達研究.pdf

1、目的:口腔鱗狀細胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常見的口腔惡性腫瘤,其發(fā)病率占口腔癌的80％,且近來發(fā)病率有上升的趨勢。口腔鱗癌的惡性程度高,而且難以早期及時發(fā)現(xiàn),容易延誤治療時機,從而影響預后。腫瘤標志物檢測是近年來發(fā)展起來的一項腫瘤診斷的新手段,對于早期診斷有著獨特的作用,成為了腫瘤學中引人注目的新領域,它反映了癌的發(fā)生、發(fā)展過程及腫瘤相關基因的激活或失活程度。有研究表明,選擇一些特異性

2、較高的腫瘤標志物聯(lián)合檢測某一腫瘤,要優(yōu)于單一指標的診斷。細胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)為Ⅰ型角蛋白,主要表達于單層上皮的上皮細胞,也散在表達于復層鱗狀上皮的基底細胞,癌組織中CK19的異常表達可作為癌的輔助診斷和鑒別診斷指標。CK19在口腔黏膜癌變過程中隨病變程度加重其表達增加,可作為診斷OSCC分化程度的輔助指標。抑癌基因 PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted

3、onchromosome ten.第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因),該基因的突變失活與人類多數(shù)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移密切相關,是第一個具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,并與組織學類型、病理分級有關。本實驗采用免疫組化SP法檢測CK19和PTEN在不同類型口腔鱗癌(包括癌及癌旁組織)中的表達,分析CK19和PTEN在鱗癌組織中的表達,以探討CK19和PTEN在口腔鱗癌發(fā)病機制中的意義,以期為臨床應用提供依據(jù)。
　　

4、方法:收集我院口腔鱗癌患者手術切除癌組織標本20例,年齡36—78歲,平均年齡56.25±11.60歲,術前未接受放、化療。按照WHO口腔鱗癌組織分型標準(Ⅰ、Ⅱ～Ⅲ級,即高、中、低分化),并切取相應的癌旁組織20例；對照組(無全身系統(tǒng)性疾病,排除可能干擾本實驗結果的口腔疾患)15例,為唇裂修補術中切除的多余唇組織、口腔外傷患者修整創(chuàng)緣的唇頰部黏膜組織或拔除阻生牙時切除的覆蓋阻生牙牙齦組織,年齡3月-67歲,平均年齡56.23歲,組織用

5、4％的中性甲醛固定液固定24小時,石蠟包埋,做4um厚的連續(xù)切片。用兔抗人CK19多克隆抗體以及兔抗人PTEN多克隆抗體,采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(SP法)進行免疫組化染色。CK19以細胞核或細胞漿中出現(xiàn)明顯的黃色或者棕黃色顆粒為陽性染色:-:陰性；±:陽性細胞在基底層或占基底上層的25％以下；+:陽性細胞占基底上層的25％～50％；++:陽性細胞占基底上層的50％～75％；+++:陽性細胞占基底上層的75％以上。PTE

6、N表達的陽性部位在細胞核或者胞漿,按每張切片選取5個高倍視野,每個視野計數(shù)100個細胞。計算各個視野中的陽性細胞的平均百分率作為該陽性細胞的百分率。將陽性細胞的比例分為5級:陽性細胞數(shù)≤5％為0分；6％～25％為1分；26％～50％為2分；51％～75％為3分；>75％為4分。陽性強度分為4級:不著色為0分；黃色為1分；棕黃色為2分；黃褐色為3分。兩項得分相乘,按照分數(shù)分為4個等級,即0～1分為(-),2～4分為(+),5～8分為(++

7、),9分以上為(+++)。最后做統(tǒng)計學分析,得出結論。所有分析均使用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件。結果:1.在口腔正常組織、癌旁組織和 OSCC中 CK19陽性率分別為13.33％(2/15)、50.00％(10/20)、85.00％(17/20),差異有統(tǒng)計學意義(X2=20.9 P<0.05)。在口腔正常組織、癌旁組織和OSCC中PTEN陽性率分別為100％(15/15)、70％(14/20)、35％(7/20),差異有統(tǒng)計學意義(X

8、2=11 P<0.05)。2.CK19的表達強度在正?？谇唤M織、癌旁組織和OSCC中表達逐漸增高,其中正常組織與癌旁組織(X2=5.12 P<0.05),癌旁組織與癌組織(X2=5.58 P<0.05),正常組織與癌組織(X2=15.21 P<0.05)差異均有統(tǒng)計學意義。在口腔正常組織、癌旁組織和OSCC中PTEN陽性率分別為100％(15/15)、70％(14/20)、35％(7/20),其中正常組織與癌組織(X2=5.43 P<0

9、.05),癌旁組織與癌組織(X2=4.91P<0.05),正常組織與癌組織(X2=13.30 P<0.05)差異均有統(tǒng)計學意義,不表達或者低表達見于分化程度差的低分化惡性腫瘤。3.CK19的表達與OSCC臨床病理學分級(X2=4.3 P<0.05)及TNM分期(X2=6.5 P<0.05)有關,與年齡、性別及腫瘤大小無關(P>0.05)。PTEN的表達與OSCC臨床病理學分級(X2=7.21 P<0.05)有關,而與TNM分期無關、年齡

10、、性別及腫瘤大小無關(P>0.05)。4.CK19隨 OSCC分化程度降低表達逐漸增高,PTEN隨OSCC分化程度降低表達逐漸減少,兩者呈負相關(P<0.05)。
　　 結論:1.CK19和抑癌基因PTEN表達異?？赡苁强谇击[癌產(chǎn)生的機制之一,與口腔鱗癌的發(fā)生及發(fā)展有關。2.CK19的表達增加及PTEN的表達減少或缺失與口腔鱗癌的組織病理學分級有關。3.CK19的表達異常與口腔鱗癌。TNM分期有關,而抑癌基因PTEN的表達異常與