CAIS-MNG250mRNA和CK19在腎癌術(shù)前、術(shù)后表達(dá)的研究.pdf

1、腎癌占到全身惡性腫瘤的3％，在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的發(fā)病率僅次于膀胱癌，其發(fā)病率大多在40歲，其發(fā)病率3.7/10萬，腎臟腫瘤的發(fā)病主要特點(diǎn)是隱匿性，轉(zhuǎn)移性較其他臟器腫瘤早并且缺乏特異性，早期診斷較為困難，尤其是影像學(xué)表現(xiàn)不典型時(shí)，腎癌的影像學(xué)與腎臟的良性實(shí)性占位病變的鑒別較為困難。因此，如何尋找腎臟腫瘤的特異性抗原，是研究提高腎癌治療效果的一大課題。
　　 在對腎腫瘤相關(guān)抗原（TAA）的研究中，發(fā)現(xiàn)碳酸酐酶9(carbonic an

2、hydraseⅨ，CAⅨ)和細(xì)胞角蛋白(CK19Mrna)具有良好的腫瘤特異性。碳酸酐酶9是新的碳酸酐酶家族(CAs)異構(gòu)體之一，其在腎細(xì)胞癌中表達(dá)的程高，在我們目前知道的腎細(xì)胞癌分子標(biāo)記物中占有重要的地位，但其在腎癌的診斷和術(shù)后的微轉(zhuǎn)移方面研究的較少。細(xì)胞角蛋白(CK19mRNA)是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)記物之一，細(xì)胞角蛋白對于維持細(xì)胞的連續(xù)性和細(xì)胞形態(tài)的穩(wěn)定具有重要的作用，細(xì)胞膠蛋白具有組織和分化的特異性及高度的保守型并在細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)

3、，細(xì)胞的增殖，分化；細(xì)胞的凋亡方面起著重要的作用，目前，細(xì)胞膠蛋白19在甲狀腺癌，胃癌及宮頸癌研究較多，但在腎癌術(shù)后微轉(zhuǎn)移方面的研究較少，本實(shí)驗(yàn)主要研究細(xì)胞膠蛋白在腎癌中的應(yīng)用。碳酸酐酶9和細(xì)胞角蛋白對于我們在臨床工作中對腎細(xì)胞癌術(shù)前診斷和術(shù)后監(jiān)測是否伴有腫瘤細(xì)胞的微轉(zhuǎn)移具有重要意義
　　 本實(shí)驗(yàn)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)從RNA水平研究碳酸酐酶9(carbonic anhydraseⅨ，CAⅨ)術(shù)后外周血的表達(dá)情

4、況及從RNA水平研究細(xì)胞角蛋白(CK19Mrna)在腎癌根治術(shù)前和術(shù)后及術(shù)后外周血的表達(dá)情況，并分析二者在腎癌發(fā)生過程過程中的機(jī)制，并探討二者作為微轉(zhuǎn)移標(biāo)記物在腎癌中的應(yīng)用。
　　 材料和方法
　　 碳酸酐酶9(carbonic anhydraseⅨ，CAⅨ)試驗(yàn)標(biāo)本收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院泌尿外科，河南省人民醫(yī)院泌尿外科，河南省腫瘤醫(yī)院外科2008年9月至2011年1月腎癌患者的外周血液標(biāo)本，共40例，其中男性28例，

5、女性22例，分別與術(shù)后6、12、18、24、30、36個(gè)月于清晨空腹抽取外周血各一份。同時(shí)根據(jù)情況選擇體格檢查及B超/CT/MRI/胸部X線檢查。血液標(biāo)本每份3ml，置于EDTAk2負(fù)壓抗凝管中防止凝結(jié)，及時(shí)提取其總RNA，凍存于-80℃冰箱中，利用RT-PCR法以GAPDH為內(nèi)參照，檢測上述標(biāo)本中CAIX mRNA的表達(dá)，并對外周血中CAIX mRNA水平行半定量測定。
　　 細(xì)胞角蛋白(CK19MRNA)試驗(yàn)標(biāo)本收集鄭州大學(xué)

6、第二附屬醫(yī)院泌尿外科，河南省人民醫(yī)院泌尿外科，河南省腫瘤醫(yī)院外科2010年1月至2011年1月腎癌組織及腎癌患者的外周血液標(biāo)本，共32例，其中臨床Ⅰ期患者8例，臨床Ⅱ期患者11例，臨床Ⅲ～Ⅳ期患者13例，臨床病理類型：腎臟透明細(xì)胞癌，腎臟嗜色細(xì)胞癌，腎臟嫌色細(xì)胞癌，分別為22例，8例，2例。作為參照，同時(shí)取10例正常組織和10例取自距癌灶邊緣3Cm以上癌旁非癌性正常組織。在術(shù)前標(biāo)本收集過程中，所有患者均未做過任何治療，組織標(biāo)本均經(jīng)病理證

7、實(shí)，組織標(biāo)本術(shù)中取出后立即置于凍存管中，并迅速轉(zhuǎn)植入-80℃冰箱凍存防止組織中的mRNA降解。16例健康志愿者于晨起空腹時(shí)采血；血液標(biāo)本量為每份3ml，腎癌患者分別在術(shù)前2小時(shí)及行腎癌根治術(shù)后一周、第二周、第三周、第四周時(shí)晨起空腹采血各一份，血液標(biāo)本量為每份3ml，置于EDTAK2抗凝管中，并及時(shí)提取其總RNA，并立即凍存于-80℃冰箱中以防止降解，。試驗(yàn)采用RT-PCR法以GAPDH為內(nèi)參照，檢測標(biāo)本中CK19 mRNA的表達(dá)，并對外

8、周血中CK19mRNA水平行半定量測定。
　　 兩種試驗(yàn)均采用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 在Ⅰ期腎癌的患者的根治術(shù)后6個(gè)月至術(shù)后36個(gè)月中，腎癌患者在18個(gè)月和24個(gè)月時(shí)間段表達(dá)有兩例轉(zhuǎn)陰，在腎癌Ⅱ期根治術(shù)后18，24，30個(gè)月時(shí)間段共有4例患者CAIXmRNA表達(dá)轉(zhuǎn)陰，在Ⅲ～Ⅳ期腎癌無患者CAIXmRNA表達(dá)轉(zhuǎn)陰，在術(shù)后6個(gè)月至術(shù)后36個(gè)月

9、Ⅲ～Ⅳ腎癌中共有7例患者死亡。腎癌患者術(shù)后術(shù)后6個(gè)月至術(shù)后36個(gè)月各時(shí)間段內(nèi)Ⅰ期，Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 腎癌患者外周血中CAIX mRNA半定量水平術(shù)后6月為0.313±0.078、術(shù)后12月0.275±0.064，術(shù)后18月，0.178±0.055，術(shù)后24月0.144±0.041，術(shù)后30月0.129±0.023，術(shù)后36月0.120±0，018。RCC患者外周血CAIX mRNA水平在腎癌根治術(shù)后隨時(shí)間

10、的推移呈明顯下降趨勢(F=38.644，P＜0.01)。各組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=104.559，P=0。000，P＜0.005)。
　　 在32例腎癌組織中，細(xì)胞膠蛋白19(CK19)的總的陽性表達(dá)率為76％(24/32)，而癌旁組織和正常組織分別為5.6％和0％，腎癌組織和二者相比較顯著高于二者（P均＜0.01），而對后二者進(jìn)行比較，差異沒有統(tǒng)計(jì)意義(P＞0.05)，CK19mRNA在病理類型為透明細(xì)胞癌的表達(dá)陽性率為85.

11、7％(19/22)，在病理類型為嗜色細(xì)胞癌的表達(dá)陽性率為39.6％(3/8)在病理類型為嫌色細(xì)胞癌的表達(dá)陽性率為0％(0/2)細(xì)胞膠蛋白19在透明細(xì)胞癌的陽性表達(dá)率和病理類型為嗜色細(xì)胞癌及嫌色細(xì)胞癌相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)表達(dá)的陽性率高于后二者，但病理類型為嗜色細(xì)胞癌和病理類型嫌色細(xì)胞癌之間細(xì)胞膠蛋白19(CK19)陽性表達(dá)率相比差距沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 32例腎癌患者的外周血中細(xì)胞角蛋白19(CK19)總的陽

12、性表達(dá)率為56.2％(18/32)，在16例健康人的對照組中細(xì)胞角蛋白19(CK19)陽性表達(dá)率為3.4％(4/16)以腎癌患者的外周血中細(xì)胞角蛋白19(CK19)總的陽性表達(dá)率和健康人的對照組中細(xì)胞角蛋白19(CK19)陽性表達(dá)率進(jìn)行比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P(0.01)。細(xì)胞角蛋白19在腎癌Ⅰ期的陽性表達(dá)率為28％(3/8)，在腎癌Ⅱ期的陽性表達(dá)率為41％(5/11)，在腎癌Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達(dá)率為79％(10/13)。其中腎癌Ⅰ期

13、，腎癌Ⅱ期，腎癌Ⅲ～Ⅳ期三者之間相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，腎癌Ⅰ期，腎癌Ⅱ期之間相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義，但腎癌Ⅲ～Ⅳ期和前二者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽性表達(dá)率顯著高于前兩組。
　　 在腎癌患者的外周血中有陽性表達(dá)的18例中，其細(xì)胞膠蛋白19核糖核酸(CK19mRN)的表達(dá)水平，術(shù)前兩天為0.49±0.11，術(shù)后一周為0.41±0.13，術(shù)后兩周為0.29±0.11，術(shù)后三周為0.24±0.16，術(shù)后四周為0.17±0.0

14、9，從整體看細(xì)胞膠蛋白19核糖核酸是在腎癌根治術(shù)后隨著時(shí)間的推移逐漸降低的(P均＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1：CAIX mRNA在腎癌的患者中，隨著時(shí)間的推移其表達(dá)量呈下降的趨勢，表明其是一種很好的腫瘤標(biāo)記物，其在腎癌的發(fā)生和發(fā)展的過程中起著重要的作用，對我們在腎癌的診斷方面提供指導(dǎo)作用。
　　 2：在試驗(yàn)中我們可以看到CK19MRNA在腎癌的不同的病理類型及非腫瘤之間的表達(dá)具有很大的差異，表明其可以作為