蛇床子素骨靶向藥物的合成及體外調節(jié)OPG-RANKL系統(tǒng)抗骨質疏松的實驗研究.pdf

1、目的：應用水溶性殼聚糖衍生物(NSC)為骨靶向載體，合成蛇床子素骨靶向新型化合物(NSC-OST);觀察NSC-OST對大鼠體外培養(yǎng)成骨細胞(Osteoblast，OB)的增殖及骨保護素(OPG)、核因子κB受體活化因子配基(RANKL)表達的影響，觀察NSC-OST對破骨細胞(Ostcoclast，OC)數量及骨吸收功能的影響，初步探討其作用機制。
　　 方法：①通過物理包埋、綜合透析等方法，制備蛇床子素骨靶向藥物。②取新生大

2、鼠顱蓋骨進行OB分離培養(yǎng)。培養(yǎng)7d后采用堿性磷酸酶(ALP)染色鑒定OB，培養(yǎng)14d后采用茜素紅染色法鑒定OB;隨機將OB分為5組，即空白對照組及終濃度為10-7mmol/L、10-6mmol/L、10-5mmol/L、10-4mmol/LNSC-OST組，分別加入不同濃度的NSC-OST作用不同時間，用MTT法檢測成骨細胞增殖情況。不同濃度的NSC-OST作用成骨細胞7d，采用ELISA法檢測藥物成骨細胞OPG、RANKL的表達。③取

3、新生乳大鼠股骨分離OC分離培養(yǎng)。分組及干預方法同前，培養(yǎng)7d后采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鑒定破骨細胞并進行陽性細胞計數；利用甲苯胺藍對骨吸收陷窩染色并在圖像分析儀上測定骨吸收陷窩的面積。
　　 結果：①本研究成功合成了具有殼聚糖衍生物結構的N-辛基-O-磺酰基殼聚糖(NOSC)，并成功制備了NSC-OST。②體外分離培養(yǎng)的細胞具有典型成骨細胞形態(tài)學及生物學活性，堿性磷酸酶、茜素紅染色均呈陽性結果；作用24h、48h、

4、72h終濃度為10-5mmol/LNSC-OST可促進OB增殖(P＜0.05)，作用72h，終濃度為10-6mmo/L可促進OB增殖(P＜0.05)；終濃度為10-4mmol/LNSC-OST具有明顯抑制OB增殖的作用(P＜0．01)。終濃度為10-6mmo/L和10-5mmol/L組促進成骨細胞OPG的表達、抑制RANKL的表達；終濃度為10-6mmol/L、10-5mmol/L組可顯著上調OPG/RANKL的比值(P＜0.01)。③

5、分離培養(yǎng)的細胞與OC相似，TRAP染色可見胞漿呈酒紅色；加藥培養(yǎng)48h，10-5mmol/L、10-4mmol/L組破骨細胞數量低于空白組(P＜0.05)，10-6mmol/L、10-5mmol/L、10-4mmol/L組骨吸收陷窩面積低于空白組(P＜0.05);96h時，不同濃度的NSC-OST組破骨細胞和骨陷窩面積均低于空白對照組(P＜0.05，P＜O.01)，10-6mmol/L、10-5mmol/L、10-4mmo/L組組間骨吸

6、收陷窩面積差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論：①本研究以水溶性殼聚糖衍生物(NSC)為骨靶向載體，成功制備并表征了蛇床子素殼聚糖衍生物膠束，其具有較好的水溶性，有利于順利達到藥物的有效治療濃度及治療部位；②適當濃度的NSC-OST可以促進成骨細胞的增殖及OPG的表達，抑制RANKL的分泌，同時能降低破骨細胞的數量，減少骨吸收陷窩的面積，從而達到抗骨質疏松的目的，可為研發(fā)靶向選擇性高、局部作用強的新型抗骨質疏松藥提供有