葛根素對(duì)于體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞OPG-RANKL基因系統(tǒng)表達(dá)的影響.pdf

1、葛根素是從中藥葛根中提取出的一種化學(xué)物質(zhì)，臨床研究發(fā)現(xiàn)，葛根素具有治療骨質(zhì)疏松癥的作用。實(shí)驗(yàn)表明，葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的其中之一機(jī)理，為其促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和分化作用相關(guān)，但是其具體的分子機(jī)制尚不明確，需要通過(guò)進(jìn)一步研究來(lái)進(jìn)行探討。
　　 目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)探討葛根素治療骨質(zhì)疏松癥的分子機(jī)制。
　　 研究方法：取新生24小時(shí)的SD大鼠頭蓋骨，使用0.1％Ⅱ型膠原酶消化法分離出成骨細(xì)胞，取第四代成骨細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用堿性磷酸

2、酶染色法以及形態(tài)學(xué)法鑒定成骨細(xì)胞，堿性磷酸酶比色法檢測(cè)葛根素對(duì)促成骨細(xì)胞分化能力的影響，通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度、不同時(shí)間葛根素藥液對(duì)成骨細(xì)胞增殖能力的影響，按照MTT法檢測(cè)的最佳葛根素藥物濃度和作用時(shí)間，作用成骨細(xì)胞，RealtimePCR法檢測(cè)其OPG/RANKL基因轉(zhuǎn)錄，WesternBlot法，檢測(cè)其OPG/RANKL蛋白量的表達(dá)，最后通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析OPG/RANKL表達(dá)量的比值變化。
　　 結(jié)果：①通過(guò)堿性磷酸酶染色法

3、，可見(jiàn)培養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)有許多細(xì)小棕色顆粒的存在鑒定為成骨細(xì)胞；②MTT結(jié)果顯示，葛根素藥物濃度為1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml時(shí)，作用成骨細(xì)胞時(shí)間為24小時(shí)后，對(duì)照相同濃度12小時(shí)和48小時(shí)處理組，MTT值顯示最明顯(1mg/ml:53.28±0.42，0.1mg/ml:66.13±0.55，0.01mg/ml:54.81±0.74)，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；③堿性磷酸酶比色法結(jié)果證實(shí)，葛根素處理液

4、濃度1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml作用成骨細(xì)胞24小時(shí)后，相比較相同濃度12小時(shí)和48小時(shí)組，堿性磷酸酶表達(dá)效果最好(1mg/ml:0.521±0.08，0.1mg/ml:0.612±0.03，0.01mg/ml:0.706±0.06)，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；④RealtimePCR法檢測(cè)了成骨細(xì)胞OPG/RANKL的基因轉(zhuǎn)錄水平，1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml三個(gè)葛根素處理

5、組，作用成骨細(xì)胞24小時(shí)后，OPG/RANKL基因轉(zhuǎn)錄比值為，1mg/ml:0.582±0.02，0.1mg/ml:0.823±0.03，0.01mg/ml:0.801±0.06，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；⑤WestemBlot法檢測(cè)了成骨細(xì)胞內(nèi)OPG/RANKL蛋白表達(dá)水平，1mg/ml，0.1mg/ml和0.01mg/ml三個(gè)葛根素處理組，作用成骨細(xì)胞24小時(shí)后，OPG/RANKL的比值為，1mg/ml:0.77±