異氟醚對轉(zhuǎn)染APP基因SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的影響以及1，4，5-三磷酸肌醇受體在其中的作用.pdf

1、目的:異氟醚是臨床常用的鹵族吸入麻醉藥，越來越多的研究證實其具有神經(jīng)毒性作用，可以導(dǎo)致術(shù)后認(rèn)知功能障礙，特別是存在神經(jīng)退行性變的老年人更易發(fā)生。阿爾茨海默病(AD)是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，淀粉樣前體蛋白(APP)基因的錯義突變與AD的發(fā)生直接有關(guān)，研究表明，轉(zhuǎn)染APP基因的細(xì)胞對異氟醚的神經(jīng)毒性敏感性增強(qiáng)。我們前期研究表明異氟醚可以引起細(xì)胞損傷，其機(jī)制與細(xì)胞內(nèi)的鈣穩(wěn)態(tài)失衡有關(guān)。細(xì)胞內(nèi)的鈣調(diào)節(jié)主要依賴于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的三種鈣離子通道，包括鈣

2、泵(Ca2+ ATPase)、1，4，5-三磷酸肌醇受體(IP3R)及藍(lán)尼啶受體(RyR)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通過IP3R受體產(chǎn)生的異常鈣外流，可引起胞漿和線粒體內(nèi)的鈣超載，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本文旨在探討在異氟醚對轉(zhuǎn)染APP基因SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的影響以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)IP3R在其中的作用。
　　方法:將轉(zhuǎn)染APP基因的SH-SY5Y細(xì)胞以1.2×104個/cm2密度接種于25 cm2的培養(yǎng)瓶中，采用隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)分為4組(n=6):空白對照

3、組（C組）、IP3R拮抗劑組（X組）、異氟醚組（I組）、異氟醚+IP3R拮抗劑組（I+X組）。繼續(xù)培養(yǎng)24 h待細(xì)胞貼壁后，C組常規(guī)培養(yǎng);X組和I+X組加入IP3R拮抗劑-Xestospongia C100 nM;30 min后I組和I+X組給予異氟醚處理，濃度維持在1.2％(1MAC)，持續(xù)8h。收集細(xì)胞，采用透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變，Annexin V/PI雙染法測定細(xì)胞凋亡率(Apoptosis Rate，AR)，F(xiàn)our-

4、3/Am測定胞漿Ca2+濃度([Ca2+]i)，Westem blot法測定IP3R蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:與C組比較，X組細(xì)胞細(xì)胞凋亡率、[Ca2+]i和IP3R蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但I(xiàn)組和I+X組細(xì)胞細(xì)胞凋亡率增加，[Ca2+]i升高，IP3R蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.01);與I組比較，I+X組細(xì)胞凋亡率和[Ca2+]i降低，IP3R蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.01)。電鏡結(jié)果顯示I組和I+X組細(xì)胞出現(xiàn)病理學(xué)