毛細(xì)管電泳和芯片毛細(xì)管電泳在藥物分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、毛細(xì)管電泳(Capillary electrophoresis，CE)又稱高效毛細(xì)管電泳(High performance capillary electrophoresis，HPCE)，是20世紀(jì)80年代在全世界范圍內(nèi)發(fā)展起來的一種新型分離分析技術(shù)，因分離效率高、分析速度快、分離模式多、所需樣品少、應(yīng)用范圍廣、自動化程度高等特點，在生命科學(xué)、生物技術(shù)、臨床醫(yī)學(xué)、藥學(xué)分析和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域顯示了極其重要的作用。芯片毛細(xì)管電泳(Microc

2、hip capillary electrophoresis，MCE)，通過微型化和集成化，把樣品前處理、反應(yīng)、分離、檢測等集成在微芯片上，被認(rèn)為是當(dāng)代分析科學(xué)最具有活力的前沿研究課題之一。 本文利用毛細(xì)管電泳和芯片毛細(xì)管電泳技術(shù)對藥物中的有效成分進(jìn)行分析，包括以下6章，主要內(nèi)容如下： 1．介紹了毛細(xì)管電泳和芯片毛細(xì)管電泳的發(fā)展簡史和應(yīng)用現(xiàn)狀，重點評述了它們在藥物分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展。 2．建立了毛細(xì)管電泳非接觸式

3、電導(dǎo)法測定紫草藥材中左旋紫草素含量的分析方法。以融硅毛細(xì)管(150 μm×70.0 cm)為分離柱，研究了緩沖液的種類、濃度、添加劑種類與添加量、分離電壓和進(jìn)樣量等因素對分離和檢測的影響，優(yōu)化選擇1.0 mmol／L H<,3>BO<,3>-3.0 mmol／L三乙胺緩沖液為電泳介質(zhì)，分離電壓18.0 kV，可實現(xiàn)分離檢測。在優(yōu)化條件下左旋紫草素線性范圍為10.0μg／mL-250μg／mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.996，檢出限為5.0μg

4、／mL(S／N=3)。兩批樣品不同濃度添加水平的日內(nèi)和日問RSD均小于4％，兩批藥材的加標(biāo)回收率分別：93.9％-97.4％和93.1％-101％。該方法簡便、快速、靈敏度高，可以用于紫草藥材的質(zhì)量控制。 3．建立了毛細(xì)管電泳非接觸式電導(dǎo)法測定復(fù)方制劑中硝酸咪康唑含量的分析方法。以融硅毛細(xì)管(150μm×60.0 cm)為分離柱，研究了緩沖液的種類、濃度、添加劑種類與添加量、分離電壓和進(jìn)樣量等因素對分離和檢測的影響，優(yōu)化選擇3.

5、O mmol／L乳酸-10％乙醇緩沖液為電泳介質(zhì)，分離電壓20.0kV，可實現(xiàn)分離檢測。在優(yōu)化條件下硝酸咪康唑線性范圍為20.0gg／mL-900μg／mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.999，檢出限為1.Oμg／mL(S／N=3)。兩種制劑不同濃度添加水平的日內(nèi)和日RSD均小于3％，兩種制劑的加標(biāo)回收率分別：94.9％-101％和95.3％-99.1％。該方法高效、靈敏，可以用于硝酸咪康唑相關(guān)制劑的質(zhì)量控制。 4．建立了毛細(xì)管電泳非接觸

6、式電導(dǎo)法分離檢測三種復(fù)方制劑中醋酸洗必泰的分析方法。以融硅毛細(xì)管(150μm×60.0 cm)為分離柱，研究了緩沖液的種類、濃度、添加劑種類與添加量、分離電壓和進(jìn)樣量等因素對分離和檢測的影響，優(yōu)化選擇0.5 mmol／LHAc-3.O mmol／LNaAc緩沖液為電泳介質(zhì)，分離電壓15.OkV，可實現(xiàn)口炎康漱口液、婦炎潔栓、潔陰抗菌洗液三種復(fù)方制劑中醋酸洗必泰的分離和檢測。在優(yōu)化條件下醋酸洗必泰線性范圍為10.0 gg／mL-200μg

7、/mL，線性相關(guān)系數(shù)為0.998，檢出限為5.0μg／mL(S／N=3)。三種樣品不同濃度添加水平的日內(nèi)和日間RSD均小于5％，加標(biāo)回收率分別為：口炎康漱口液93.2％-98.7％、婦炎潔栓劑91.2％-93.5％、沽陰抗菌洗液99.8％-103％。該方法簡便、快速、靈敏度高，為這些制劑的質(zhì)量控制提供了一種有效方法。 5．在國內(nèi)首次研制了一種芯片毛細(xì)管電泳非接觸式電導(dǎo)檢測裝置。此裝置具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、操作方便等優(yōu)點。芯片與電

8、極板之間相互獨(dú)立，兩者的更換和清洗等操作非常方便。檢測可在較低的激發(fā)電壓(20-110 V)和在較低的激發(fā)頻率(40-65kHz)下進(jìn)行。檢測電極和溶液之間隔離，不僅避免了電極的污染中毒和電極附近氣泡的產(chǎn)生，而且消除了分離高壓的干擾。利用改儀器對鉀離子進(jìn)行測定，檢出限(LOD)為lO gmol／L。并實現(xiàn)了對4種氨基酸和3種神經(jīng)遞質(zhì)的分離和檢測。 6．采用自行研制的芯片毛細(xì)管電泳非接觸式電導(dǎo)檢測裝置，對九種中藥和兩種制劑中的主要

9、生物堿成分進(jìn)行了測定研究。實驗條件：激發(fā)頻率60 kHz，激發(fā)電壓60 V(Vp-p)，緩沖溶液20mmol／L，MES-20mmol／LIIis，進(jìn)樣電壓0.5kV，進(jìn)樣時間10s，分離電壓3.O kV，通道有效分離長度90mm。在上述相同的條件下實現(xiàn)了九種藥材和兩種制劑中主要生物堿的分離測定：(1)黃連、黃柏、功勞木(十大功勞)中的小檗堿和藥根堿，小檗堿片中的小檗堿，京制牛黃解毒片中的小檗堿和藥根堿的測定；(2)苦參和山豆根中的苦參