毛細(xì)管電泳新技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、毛細(xì)管電泳和高效液相色譜作為現(xiàn)代的分離分析技術(shù)，兩者在一定程度上互為補(bǔ)充，但無(wú)論在分離機(jī)制、對(duì)樣品的預(yù)處理要求以及在線富集方面，CE都顯示了獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，作為HPLC的補(bǔ)充，解決了眾多HPLC不能解決或難以解決的問(wèn)題，在藥物分析中得到廣泛的應(yīng)用。對(duì)于分子結(jié)構(gòu)中含有強(qiáng)絡(luò)合基團(tuán)的物質(zhì)，由于其能與HPLC色譜柱中殘存的金屬離子發(fā)生絡(luò)合作用，常常導(dǎo)致色譜峰變寬、拖尾，嚴(yán)重時(shí)影響分離效果。CE具有不同于傳統(tǒng)分離技術(shù)的分離機(jī)制，它將經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代

2、微柱分離技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)帶電粒子在電場(chǎng)力的作用下，在毛細(xì)管中按其淌度的不同進(jìn)行高效、快速的分離。電場(chǎng)力的驅(qū)動(dòng)能有效地減小被測(cè)物質(zhì)在毛細(xì)管中的擴(kuò)散，提高柱效，改善拖尾。HPLC的分離效率取決于其填料的粒度、均勻度和填料的多孔狀結(jié)構(gòu)，樣品的預(yù)處理對(duì)色譜柱壽命影響較大，因而HPLC分析常常需要細(xì)致繁雜的樣品預(yù)處理過(guò)程，而CE的分離主要取決于樣品組分的性質(zhì)，其分離通道為中空的石英毛細(xì)管，對(duì)樣品的預(yù)處理要求較低。此外，HPLC不具備在線富集功能，

3、只能通過(guò)離線預(yù)處理對(duì)樣品進(jìn)行富集而達(dá)到提高檢測(cè)靈敏度的目的。
　　 本課題旨在采用CE新技術(shù)，如膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜、中空纖維分離-毛細(xì)管區(qū)帶電泳法、CE場(chǎng)放大富集技術(shù)等，解決常規(guī)分析方法不能解決或難以解決的問(wèn)題，克服了常規(guī)分析方法的弊端，簡(jiǎn)化了試驗(yàn)操作，為藥物的質(zhì)量控制提供了新的、方便實(shí)用的分析手段。具體研究如下：（1）由于環(huán)吡酮胺分子結(jié)構(gòu)中的N-OH與試驗(yàn)所用溶劑、試劑和色譜柱中殘存的金屬離子具有強(qiáng)烈的絡(luò)合作用，采用HPLC法

4、對(duì)其進(jìn)行測(cè)定時(shí)導(dǎo)致色譜峰嚴(yán)重拖尾，即使采用清洗劑和流動(dòng)相對(duì)色譜柱沖洗20 h后，拖尾現(xiàn)象仍未得到充分改善，因此該法只能用于測(cè)定環(huán)吡酮胺有關(guān)物質(zhì)，而含量測(cè)定則采用紫外分光光度法。本課題利用CE與HPLC分離機(jī)制的不同，建立了膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法對(duì)環(huán)吡酮胺及其降解產(chǎn)物進(jìn)行分離分析，該方法簡(jiǎn)便、快速、分離效率高，為生產(chǎn)過(guò)程中環(huán)吡酮胺的快速質(zhì)量控制提供了新的、方便實(shí)用的分析手段。（2）將新型中空纖維離線樣品預(yù)處理與毛細(xì)管區(qū)帶電泳在線檢測(cè)技術(shù)相結(jié)

5、合，建立中空纖維分離-毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量的方法。將裝有樣品溶液的U型中空纖維垂直置于離心管中，在離心力的作用下，使樣品中的小分子苯扎溴銨通過(guò)中空纖維膜，而大分子羥丙甲纖維素被截留在膜外，去除了大分子濾液，可直接采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法分析苯扎溴銨的含量。該法克服了傳統(tǒng)分析方法繁瑣、費(fèi)時(shí)、選擇性差和影響色譜柱壽命等缺點(diǎn)，為苯扎溴銨的分離分析提供了新型、簡(jiǎn)便、環(huán)保的分析手段。（3）采用CE場(chǎng)放大富集技術(shù)建立了

6、常用中藥制劑中痕量有效毒性成分的富集檢測(cè)方法，通過(guò)對(duì)樣品、背景電解質(zhì)溶液的組成以及進(jìn)樣程序等進(jìn)行簡(jiǎn)單的調(diào)控，使其檢測(cè)靈敏度提高400倍以上。該法經(jīng)濟(jì)、快速，靈敏度與傳統(tǒng)的HPLC法相當(dāng)。（4）建立CE場(chǎng)放大富集技術(shù)測(cè)定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量的方法，該方法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、富集效率高，可用于濫用藥物監(jiān)測(cè)及法醫(yī)毒理試驗(yàn)室中濫用藥物的初步篩選。
　　 一、膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法快速測(cè)定環(huán)吡酮胺的含量
　　 目的：建立膠

7、束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法快速分離環(huán)吡酮胺及其降解產(chǎn)物并測(cè)定環(huán)吡酮胺制劑中環(huán)吡酮胺的含量的方法。
　　 方法：采用未涂層熔融石英毛細(xì)管（50μm i.d.×45 cm，有效長(zhǎng)度38 cm）為分離通道，200 mmol·L-1硼酸鹽（pH=8.0）含20 mmol·L-1SDS、2 mg·mL-1EDTA為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓10 kV；液體壓差進(jìn)樣，進(jìn)樣高度10 cm，進(jìn)樣時(shí)間5 s；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)298 nm。
　　 結(jié)果：環(huán)

8、吡酮胺及其降解產(chǎn)物分離良好。環(huán)吡酮胺的出峰時(shí)間為3.6 min，整個(gè)分析時(shí)間低于10.0 min。環(huán)吡酮胺在31.3～2.00×103μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為9.39μg·mL-1。環(huán)吡酮胺栓劑的平均回收率為99.7％，RSD為0.9％；環(huán)吡酮胺軟膏的平均回收率為100.3％，RSD為1.4％。
　　 結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、快速、分離效率高，可用于生產(chǎn)過(guò)程中環(huán)吡酮胺的快速質(zhì)量控制。
　　 二、中空纖維分

9、離-毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量
　　 目的：建立一種新型、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的利用中空纖維對(duì)樣品中的羥丙甲纖維素和苯扎溴銨進(jìn)行分離，毛細(xì)管區(qū)帶電泳法直接測(cè)定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量的方法。
　　 方法：將裝有樣品溶液的U型中空纖維垂直置于離心管中，在離心力的作用下進(jìn)行超濾，從而分離羥丙甲纖維素滴眼液中的大分子羥丙甲纖維素和小分子苯扎溴銨。分析方法采用未涂層熔融石英毛細(xì)管柱為分離通道，50 m

10、mol·L-1磷酸鹽-乙腈為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓20 kV；液體壓差進(jìn)樣，進(jìn)樣高度10 cm，進(jìn)樣時(shí)間10 s；檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm。
　　 結(jié)果：羥丙甲纖維素和苯扎溴銨實(shí)現(xiàn)了良好分離。苯扎溴銨在24.9～3.99×102μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為3.11μg·mL-1，平均回收率為98.4％，RSD為2.0％。
　　 結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，為羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的分離分

11、析提供了新的、方便實(shí)用的手段。
　　 三、常用中藥制劑中痕量有效毒性成分的富集與檢測(cè)
　　 （一）CE場(chǎng)放大富集技術(shù)快速測(cè)定溫胃舒顆粒中痕量毒性成分烏頭堿
　　 目的：建立CE場(chǎng)放大富集技術(shù)快速檢測(cè)溫胃舒顆粒中痕量有效毒性成分烏頭堿的方法。
　　 方法：采用未涂層石英毛細(xì)管為分離通道，60 mmol·L-1磷酸鹽乙腈為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓10 kV；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm。采用場(chǎng)放大富集進(jìn)樣方式，將樣

12、品溶解于20％的乙腈中。富集程序?yàn)椋核后w壓差進(jìn)樣5 s，進(jìn)樣高度10cm；樣品溶液電遷移進(jìn)樣30 s，進(jìn)樣電壓12 kV。
　　 結(jié)果：該法使烏頭堿得到了選擇性的富集，檢測(cè)靈敏度提高約400倍。烏頭堿在37.5～2.40×103 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為9.38 ng·mL-1，平均回收率為97.7％，RSD為2.2％。
　　 結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快速、專屬性強(qiáng)、富集效率高，為溫胃舒顆粒生產(chǎn)過(guò)程中的

13、質(zhì)量控制及臨床藥物監(jiān)測(cè)提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 (二）小活絡(luò)丸中痕量毒性成分烏頭堿的快速限量檢測(cè)
　　 目的：建立CE場(chǎng)放大富集技術(shù)快速檢測(cè)小活絡(luò)丸中痕量毒性成分烏頭堿的方法。
　　 方法：采用未涂層石英毛細(xì)管為分離通道，60 mmol·L-1磷酸鹽.乙腈為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓10 kV；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)235 nm。采用場(chǎng)放大富集進(jìn)樣方式，將樣品溶解于20％的乙腈中。富集程序?yàn)椋核后w壓差進(jìn)樣5 s

14、，進(jìn)樣高度10cm；樣品溶液電遷移進(jìn)樣30 s，進(jìn)樣電壓12 kV。
　　 結(jié)果：該法使烏頭堿的檢測(cè)靈敏度提高了約400倍。烏頭堿在37.5～2.40×103ng·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為9.38 ng·mL-1，平均回收率為97.6％，RSD為1.9％。
　　 結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快速、專屬性強(qiáng)、選擇性好、富集效率高，為小活絡(luò)丸的生產(chǎn)及質(zhì)量控制提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 （三）骨筋丸膠

15、囊中毒性成分士的寧和馬錢子堿的在線富集檢測(cè)
　　 目的：建立CE場(chǎng)放大富集技術(shù)同時(shí)檢測(cè)骨筋丸膠囊中有效毒性成分士的寧和馬錢子堿的方法。
　　 方法：選擇未涂漬彈性石英毛細(xì)管為分離通道，20 mmol·L-1醋酸鈉為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓20 kV；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm。采用場(chǎng)放大富集進(jìn)樣方式，將樣品溶解于20％的甲醇中。富集程序?yàn)椋核后w壓差進(jìn)樣3 s，進(jìn)樣高度10cm；樣品溶液電遷移進(jìn)樣25 s，進(jìn)樣電壓20 kV

16、。
　　 結(jié)果：該方法使士的寧和馬錢子堿的檢測(cè)靈敏度分別提高了約600倍和400倍。士的寧在14.8～9.40×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為1.85ng·mL-1，平均回收率為98.5％，RSD為1.9％；馬錢子堿在17.2～1.09×103ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為2.15 ng·mL-1，平均回收率為98.5％，RSD為1.8％。
　　 結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便、快速、富

17、集效率高，為骨筋丸膠囊生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制及臨床藥物監(jiān)測(cè)提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 四、CE場(chǎng)放大富集技術(shù)快速測(cè)定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量
　　 目的：建立CE場(chǎng)放大富集技術(shù)同時(shí)測(cè)定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量的方法。
　　 方法：選擇未涂漬彈性石英毛細(xì)管為分離通道，20 mmol·L-1醋酸鈉為運(yùn)行緩沖溶液；運(yùn)行電壓20 kV；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm。采用場(chǎng)放大富集進(jìn)樣方式，將樣品溶解

18、于20％的甲醇中。富集程序?yàn)椋核后w壓差進(jìn)樣3 s，進(jìn)樣高度10cm；樣品溶液電遷移進(jìn)樣25 s，進(jìn)樣電壓20 kV。
　　 結(jié)果：該方法使士的寧和馬錢子堿的檢測(cè)靈敏度分別提高了約550倍和350倍。士的寧在8.00-2.56×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為2.00ng-mL-1；馬錢子堿在10.0-3.20×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測(cè)限為2.50 ng·mL-1。