毛細管電泳新技術在藥物分析中的應用.pdf

1、毛細管電泳和高效液相色譜作為現(xiàn)代的分離分析技術，兩者在一定程度上互為補充，但無論在分離機制、對樣品的預處理要求以及在線富集方面，CE都顯示了獨特的優(yōu)勢，作為HPLC的補充，解決了眾多HPLC不能解決或難以解決的問題，在藥物分析中得到廣泛的應用。對于分子結構中含有強絡合基團的物質(zhì)，由于其能與HPLC色譜柱中殘存的金屬離子發(fā)生絡合作用，常常導致色譜峰變寬、拖尾，嚴重時影響分離效果。CE具有不同于傳統(tǒng)分離技術的分離機制，它將經(jīng)典電泳技術與現(xiàn)代

2、微柱分離技術相結合，通過帶電粒子在電場力的作用下，在毛細管中按其淌度的不同進行高效、快速的分離。電場力的驅(qū)動能有效地減小被測物質(zhì)在毛細管中的擴散，提高柱效，改善拖尾。HPLC的分離效率取決于其填料的粒度、均勻度和填料的多孔狀結構，樣品的預處理對色譜柱壽命影響較大，因而HPLC分析常常需要細致繁雜的樣品預處理過程，而CE的分離主要取決于樣品組分的性質(zhì)，其分離通道為中空的石英毛細管，對樣品的預處理要求較低。此外，HPLC不具備在線富集功能，

3、只能通過離線預處理對樣品進行富集而達到提高檢測靈敏度的目的。
　　 本課題旨在采用CE新技術，如膠束電動毛細管色譜、中空纖維分離-毛細管區(qū)帶電泳法、CE場放大富集技術等，解決常規(guī)分析方法不能解決或難以解決的問題，克服了常規(guī)分析方法的弊端，簡化了試驗操作，為藥物的質(zhì)量控制提供了新的、方便實用的分析手段。具體研究如下：（1）由于環(huán)吡酮胺分子結構中的N-OH與試驗所用溶劑、試劑和色譜柱中殘存的金屬離子具有強烈的絡合作用，采用HPLC法

4、對其進行測定時導致色譜峰嚴重拖尾，即使采用清洗劑和流動相對色譜柱沖洗20 h后，拖尾現(xiàn)象仍未得到充分改善，因此該法只能用于測定環(huán)吡酮胺有關物質(zhì)，而含量測定則采用紫外分光光度法。本課題利用CE與HPLC分離機制的不同，建立了膠束電動毛細管色譜法對環(huán)吡酮胺及其降解產(chǎn)物進行分離分析，該方法簡便、快速、分離效率高，為生產(chǎn)過程中環(huán)吡酮胺的快速質(zhì)量控制提供了新的、方便實用的分析手段。（2）將新型中空纖維離線樣品預處理與毛細管區(qū)帶電泳在線檢測技術相結

5、合，建立中空纖維分離-毛細管區(qū)帶電泳法測定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量的方法。將裝有樣品溶液的U型中空纖維垂直置于離心管中，在離心力的作用下，使樣品中的小分子苯扎溴銨通過中空纖維膜，而大分子羥丙甲纖維素被截留在膜外，去除了大分子濾液，可直接采用毛細管區(qū)帶電泳法分析苯扎溴銨的含量。該法克服了傳統(tǒng)分析方法繁瑣、費時、選擇性差和影響色譜柱壽命等缺點，為苯扎溴銨的分離分析提供了新型、簡便、環(huán)保的分析手段。（3）采用CE場放大富集技術建立了

6、常用中藥制劑中痕量有效毒性成分的富集檢測方法，通過對樣品、背景電解質(zhì)溶液的組成以及進樣程序等進行簡單的調(diào)控，使其檢測靈敏度提高400倍以上。該法經(jīng)濟、快速，靈敏度與傳統(tǒng)的HPLC法相當。（4）建立CE場放大富集技術測定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量的方法，該方法簡便、快速、經(jīng)濟、富集效率高，可用于濫用藥物監(jiān)測及法醫(yī)毒理試驗室中濫用藥物的初步篩選。
　　 一、膠束電動毛細管色譜法快速測定環(huán)吡酮胺的含量
　　 目的：建立膠

7、束電動毛細管色譜法快速分離環(huán)吡酮胺及其降解產(chǎn)物并測定環(huán)吡酮胺制劑中環(huán)吡酮胺的含量的方法。
　　 方法：采用未涂層熔融石英毛細管（50μm i.d.×45 cm，有效長度38 cm）為分離通道，200 mmol·L-1硼酸鹽（pH=8.0）含20 mmol·L-1SDS、2 mg·mL-1EDTA為運行緩沖溶液；運行電壓10 kV；液體壓差進樣，進樣高度10 cm，進樣時間5 s；紫外檢測波長298 nm。
　　 結果：環(huán)

8、吡酮胺及其降解產(chǎn)物分離良好。環(huán)吡酮胺的出峰時間為3.6 min，整個分析時間低于10.0 min。環(huán)吡酮胺在31.3～2.00×103μg·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為9.39μg·mL-1。環(huán)吡酮胺栓劑的平均回收率為99.7％，RSD為0.9％；環(huán)吡酮胺軟膏的平均回收率為100.3％，RSD為1.4％。
　　 結論：該方法簡便、快速、分離效率高，可用于生產(chǎn)過程中環(huán)吡酮胺的快速質(zhì)量控制。
　　 二、中空纖維分

9、離-毛細管區(qū)帶電泳法測定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量
　　 目的：建立一種新型、簡便、經(jīng)濟的利用中空纖維對樣品中的羥丙甲纖維素和苯扎溴銨進行分離，毛細管區(qū)帶電泳法直接測定羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的含量的方法。
　　 方法：將裝有樣品溶液的U型中空纖維垂直置于離心管中，在離心力的作用下進行超濾，從而分離羥丙甲纖維素滴眼液中的大分子羥丙甲纖維素和小分子苯扎溴銨。分析方法采用未涂層熔融石英毛細管柱為分離通道，50 m

10、mol·L-1磷酸鹽-乙腈為運行緩沖溶液；運行電壓20 kV；液體壓差進樣，進樣高度10 cm，進樣時間10 s；檢測波長214 nm。
　　 結果：羥丙甲纖維素和苯扎溴銨實現(xiàn)了良好分離。苯扎溴銨在24.9～3.99×102μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為3.11μg·mL-1，平均回收率為98.4％，RSD為2.0％。
　　 結論：本法簡便、快速、準確、專屬性強，為羥丙甲纖維素滴眼液中苯扎溴銨的分離分

11、析提供了新的、方便實用的手段。
　　 三、常用中藥制劑中痕量有效毒性成分的富集與檢測
　　 （一）CE場放大富集技術快速測定溫胃舒顆粒中痕量毒性成分烏頭堿
　　 目的：建立CE場放大富集技術快速檢測溫胃舒顆粒中痕量有效毒性成分烏頭堿的方法。
　　 方法：采用未涂層石英毛細管為分離通道，60 mmol·L-1磷酸鹽乙腈為運行緩沖溶液；運行電壓10 kV；紫外檢測波長235 nm。采用場放大富集進樣方式，將樣

12、品溶解于20％的乙腈中。富集程序為：水液體壓差進樣5 s，進樣高度10cm；樣品溶液電遷移進樣30 s，進樣電壓12 kV。
　　 結果：該法使烏頭堿得到了選擇性的富集，檢測靈敏度提高約400倍。烏頭堿在37.5～2.40×103 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為9.38 ng·mL-1，平均回收率為97.7％，RSD為2.2％。
　　 結論：本方法簡便、快速、專屬性強、富集效率高，為溫胃舒顆粒生產(chǎn)過程中的

13、質(zhì)量控制及臨床藥物監(jiān)測提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 (二）小活絡丸中痕量毒性成分烏頭堿的快速限量檢測
　　 目的：建立CE場放大富集技術快速檢測小活絡丸中痕量毒性成分烏頭堿的方法。
　　 方法：采用未涂層石英毛細管為分離通道，60 mmol·L-1磷酸鹽.乙腈為運行緩沖溶液；運行電壓10 kV；紫外檢測波長235 nm。采用場放大富集進樣方式，將樣品溶解于20％的乙腈中。富集程序為：水液體壓差進樣5 s

14、，進樣高度10cm；樣品溶液電遷移進樣30 s，進樣電壓12 kV。
　　 結果：該法使烏頭堿的檢測靈敏度提高了約400倍。烏頭堿在37.5～2.40×103ng·ml-1范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為9.38 ng·mL-1，平均回收率為97.6％，RSD為1.9％。
　　 結論：本方法簡便、快速、專屬性強、選擇性好、富集效率高，為小活絡丸的生產(chǎn)及質(zhì)量控制提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 （三）骨筋丸膠

15、囊中毒性成分士的寧和馬錢子堿的在線富集檢測
　　 目的：建立CE場放大富集技術同時檢測骨筋丸膠囊中有效毒性成分士的寧和馬錢子堿的方法。
　　 方法：選擇未涂漬彈性石英毛細管為分離通道，20 mmol·L-1醋酸鈉為運行緩沖溶液；運行電壓20 kV；紫外檢測波長260 nm。采用場放大富集進樣方式，將樣品溶解于20％的甲醇中。富集程序為：水液體壓差進樣3 s，進樣高度10cm；樣品溶液電遷移進樣25 s，進樣電壓20 kV

16、。
　　 結果：該方法使士的寧和馬錢子堿的檢測靈敏度分別提高了約600倍和400倍。士的寧在14.8～9.40×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為1.85ng·mL-1，平均回收率為98.5％，RSD為1.9％；馬錢子堿在17.2～1.09×103ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為2.15 ng·mL-1，平均回收率為98.5％，RSD為1.8％。
　　 結論：本方法簡便、快速、富

17、集效率高，為骨筋丸膠囊生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制及臨床藥物監(jiān)測提供了一種新的、可靠的分析手段。
　　 四、CE場放大富集技術快速測定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量
　　 目的：建立CE場放大富集技術同時測定人體尿液中士的寧和馬錢子堿的含量的方法。
　　 方法：選擇未涂漬彈性石英毛細管為分離通道，20 mmol·L-1醋酸鈉為運行緩沖溶液；運行電壓20 kV；紫外檢測波長260 nm。采用場放大富集進樣方式，將樣品溶解

18、于20％的甲醇中。富集程序為：水液體壓差進樣3 s，進樣高度10cm；樣品溶液電遷移進樣25 s，進樣電壓20 kV。
　　 結果：該方法使士的寧和馬錢子堿的檢測靈敏度分別提高了約550倍和350倍。士的寧在8.00-2.56×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為2.00ng-mL-1；馬錢子堿在10.0-3.20×102 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關系良好，最低檢測限為2.50 ng·mL-1。