多巴胺受體在利多卡因中毒驚厥過(guò)程中的作用.pdf

1、目的：應(yīng)用鹽酸利多卡因致大鼠中毒驚厥模型，觀察中毒驚厥過(guò)程中大鼠海馬多巴胺(DA)含量的變化，并應(yīng)用多巴胺D1受體激動(dòng)劑SKF38393和D2受體激動(dòng)劑培高麗特(pergolide)，觀察多巴胺D1和D2受體含量變化，探討多巴胺受體在利多卡因致大鼠中毒驚厥過(guò)程中的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物模型的制備健康雄性Wistar大鼠24只，體重250±20g(河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。隨機(jī)均分為四組：

2、對(duì)照組（S組），利多卡因組（L組），利多卡因+SKF組(LS組)，利多卡因+培高麗特組（LP組）。
　　 大鼠腹腔注射10％水合氯醛350mg/kg麻醉后，于尾靜脈穿刺置24號(hào)套管針，接肝素帽并貼好敷貼備用。24小時(shí)清醒后，將連有延長(zhǎng)管的注射器與尾靜脈相連，持續(xù)泵入研究用藥，按照實(shí)驗(yàn)分組給予不同的處理：S組：生理鹽水以3m1/h的速度經(jīng)尾靜脈持續(xù)泵入；L組：持續(xù)靜注2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到出現(xiàn)全身不自主或不

3、協(xié)調(diào)的抽搐時(shí)停止泵入局麻藥，然后經(jīng)尾靜脈輸注3m1/h生理鹽水；LS組：以10mg/kg腹腔注射SKF38393，于一小時(shí)后經(jīng)尾靜脈持續(xù)注入2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到出現(xiàn)抽搐時(shí)停止泵入局麻藥，然后經(jīng)尾靜脈輸注3m1/h生理鹽水；LP組：經(jīng)腹腔注射1mg/kg培高麗特，于一小時(shí)后經(jīng)尾靜脈持續(xù)注入2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到驚厥時(shí)停止注藥，然后經(jīng)尾靜脈輸注3ml/h生理鹽水。記錄利多卡因致驚厥的劑量及驚

4、厥持續(xù)時(shí)間。
　　 2.標(biāo)本的處理
　　 驚厥后10分鐘大鼠深麻醉下快速斷頭處死大鼠，打開(kāi)顱腔，取出腦組織，冷生理鹽水沖洗。保留半側(cè)腦組織和取另一側(cè)海馬。
　　 將腦組織放入4％的多聚甲醛后，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，4μm厚連續(xù)冠狀切片。多巴胺受體免疫組化測(cè)定按照EliVision puls免疫組化染色試劑盒進(jìn)行。光鏡下(10×40)計(jì)數(shù)5個(gè)視野的棕黃色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算出平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)以(x)±s表示，采用

5、SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 將另一側(cè)海馬取出后迅速放入液氮中冷凍待測(cè)。測(cè)量時(shí)以5％生理鹽水作均漿介質(zhì)，研磨成10％的組織均漿，以3000r4nin離心20min，取上清液待測(cè)。用ELISA法測(cè)定海馬組織勻漿中多巴胺含量。
　　 3.多巴胺含量的測(cè)量雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)方法為將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被大鼠DA單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)

6、間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠DA濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中大鼠DA含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組之間大鼠體重比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.各組驚厥發(fā)生時(shí)間比較除S組外，各組均出現(xiàn)

7、了驚厥。L組、LS組和LP組從泵入利多卡因到出現(xiàn)驚厥的時(shí)間(min)分別為：16.011±0.803、10.833±1.605和19.581±1.361。與L組相比，LS組出現(xiàn)驚厥時(shí)間明顯縮短(P<0.05)；而LP組則相反，出現(xiàn)驚厥時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P<0.05）。
　　 3.各組間海馬CA1區(qū)多巴胺D1、D2受體陽(yáng)性表達(dá)的比較S組、L組、LS組和LP組海馬CA1區(qū)D1受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（個(gè)/HP）分別為：45±5、25±2、38±2

8、和29±2;D2受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（個(gè)/HP）分別為：41±3、50±2、48±3和59±3。
　　 與S組相比，L組，LS組和LP組的多巴胺D1受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均減少，D2受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均增加(P<0.05)。與L組相比，LS組D1受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加(P<0.05)，D2受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著差異(P>0.05)；LP組D2受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加(P<0.05)，D1受體陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　 4.各組間海馬

9、DA含量的比較S組、L組、LP組和LS組的DA含量(ng/L)分別是：53.325±3.690、66.338±2.205、78.828±2.042和81.931±2.701。
　　 與S組比較，各組多巴胺含量均增加(P<0.05)。與L組比較，LS組與LP組多巴胺含量均增加(P<0.05)。LS組多巴胺含量與LP組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：利多卡因致大鼠中毒驚厥過(guò)程中，海馬CA1區(qū)多巴胺D1受體活性