影響SW480細(xì)胞中腸干細(xì)胞特異性標(biāo)記物Musashi-1表達(dá)的研究.pdf

1、目的：研究腸道干細(xì)胞特異性標(biāo)記物Musashi-1在SW480結(jié)直腸癌細(xì)胞株中表達(dá)的影響因素，并初步探討其中的機(jī)制。 方法：MTT法研究5-FU、奧沙利鉑及順鉑對(duì)sW480細(xì)胞體外生長(zhǎng)的抑制作用。流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)SP細(xì)胞比例及CD34<'+>CD44<'+>細(xì)胞比例；免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)BrdU(5-溴-2脫氧尿嘧啶核苷)標(biāo)記情況以及細(xì)胞內(nèi)M1asashi-1表達(dá)的定位；半定量RT-PCR方法和Westem-Blot方法檢測(cè)腸

2、道干細(xì)胞特異性標(biāo)記Musashi-1mR2NA和蛋白的表達(dá)。連續(xù)三次體外克隆形成試驗(yàn)培養(yǎng)SW480細(xì)胞獲得高成瘤性的腫瘤細(xì)胞并擴(kuò)增不同代數(shù)。 結(jié)果：5-FU不同作用時(shí)間(24、48、72h)的半數(shù)抑制濃度分別為32.12、16.2和6.8 mg/l，SP細(xì)胞比例、CDD34<'+>CD44<'+>細(xì)胞以及Musashi-1 mRNA和蛋白表達(dá)在5-Fu作用后均增加(P<0.05)。奧沙利鉑、順鉑作用48h的半數(shù)抑制濃度分別為8.

3、02和6.2 mg/l，同時(shí)Musashi-1 mRNA表達(dá)增加(P<0.05)。隨著克隆形成試驗(yàn)進(jìn)行，克隆形成率呈增加；克隆形成試驗(yàn)獲得的第一代與第二代細(xì)胞中SP細(xì)胞比例、BrdU滯留試驗(yàn)的BrdU陽(yáng)性率以及.Musashi-1的RNA和蛋白表達(dá)均高于未處理的SW480細(xì)胞(P<0.05)，而第四代細(xì)胞的各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果與原細(xì)胞株相比無(wú)增高(P>0.05)；免疫細(xì)胞化學(xué)將Musashi-1蛋白定位胞漿內(nèi)。 結(jié)論：5-FU、奧沙利鉑