RNAi特異性抑制胃癌細胞β-catenin基因表達的研究.pdf

1、鄭碩士學(xué)位披予單。正代碼：!Q!i!字號或申請?zhí)枺篞!Q!!!蟹級：金五學(xué)論文論文題日：RNAi特異性抑制胃癌細胞B—catenin基因表達的研究作者姓名學(xué)科門類專業(yè)名稱導(dǎo)師姓名、職稱劉興濤醫(yī)學(xué)人體解剖學(xué)與組織胚胎學(xué)張欽憲教授J一副教授二零零盂年五月十五B鄭州大學(xué)2005屆碩士學(xué)位論文RNAi特異性抑制胃癌細胞13一catenin基因表達的研究突變可致B一連環(huán)蛋白降解過程中斷，在胞質(zhì)內(nèi)積聚后和TCF／LEF等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合進入細胞核內(nèi)促進

2、cmyc、cyclinDI等基因過度表達，使細胞異常增殖引發(fā)腫瘤。據(jù)統(tǒng)計，人類60％的腫瘤中發(fā)現(xiàn)有pcatenin活性增高或高表達，胃癌也不例外。胃癌Bcatenin的高表達提示其可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。對13一catenin進行特異性抑制有助于更好地揭示它在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用本研究應(yīng)用RNAi技術(shù)對胃癌BGC823細胞系pcatenin基因進行抑制，檢測抑制后的細胞生長情況，研究6catenin在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為今

3、后應(yīng)用RNAi技術(shù)對胃癌進行基因治療提供實驗依據(jù)。材料和方法1胃癌BGC823細胞的培養(yǎng)：胃癌BGC823細胞以10％胎牛血清培養(yǎng)液(含青、鏈霉素各100u／m1)在37。G、5％C02條件下貼壁培養(yǎng)。2shRNA的體外合成和鑒定：首先合成DNA模板，3’端為T7啟動子序列，可在體外和TTRNA聚合酶結(jié)合轉(zhuǎn)錄出目的shRNA(49nt)。合成的shRNA分別命名為R1、R2和R0。應(yīng)用2％瓊脂糖凝膠電泳，以定量模板DNA為參照測定shR

4、NA的長度和濃度。3細胞實驗分組：取對數(shù)生長期細胞隨機分為處理組(R。組和R2組)和對照組(cl組和C2組)，分別加入體外合成的Rl(Rl組)、R2(R2組)、Ro(cl組)和空轉(zhuǎn)染載體(C2組)。4轉(zhuǎn)染：應(yīng)用CodeBreakerTMsiRNATransfectionReagent將shRNA轉(zhuǎn)染各組細胞。5轉(zhuǎn)染后檢測：RTPCR、MTT實驗、平板克隆形成實驗檢測細胞內(nèi)靶基因的表達和癌細胞生長情況。6統(tǒng)計方法：應(yīng)用SPSS110統(tǒng)計學(xué)