白念珠菌多位點(diǎn)序列分型研究.pdf

1、目的:應(yīng)用多位點(diǎn)序列分型(MultilocusSequenceTyping，MLST)對(duì)臨床分離白念珠菌進(jìn)行分型研究，同時(shí)與ABC(ATP-bindingcassette)分型、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA技術(shù)(randomLyamplifiedpolymorphicDNA，RAPD)結(jié)果比較，研究菌株分型與標(biāo)本來(lái)源、藥物敏感性等之間的關(guān)系，建立國(guó)內(nèi)白念珠菌MLST數(shù)據(jù)庫(kù)。
　　方法:
　　1.收集臨床分離白念珠菌，進(jìn)行體外藥物敏感性

2、測(cè)定，選取10株氟康唑耐藥株，23株氟康唑敏感株，提取菌株DNA。
　　2.建立MLST分型方法，選擇7對(duì)管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將目的基因產(chǎn)物測(cè)序，然后將測(cè)序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)后上傳至MLST網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得相應(yīng)的由7對(duì)管家基因組成的等位基因譜，最后將等位基因譜再次提交網(wǎng)站確認(rèn)序列型(Sequencetypes，STs)。
　　3.選取ABC分型和RAPD特定引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后確定分型。
　

3、　4.將MLST結(jié)果經(jīng)MEGA4.0生物信息學(xué)分析軟件分析后，采用非加權(quán)分組算術(shù)均方根法(UPGMA)制作最小生成樹(shù)，進(jìn)一步分析ST與菌株信息、其他分型方法的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.33株臨床白念珠菌通過(guò)MLST產(chǎn)生了33個(gè)STs，采用ABC方法分類為3型，采用RAPD方法引物RSD-12產(chǎn)生13型，引物OPE-18產(chǎn)生11型。
　　2.最小生成樹(shù)選取區(qū)分值0.0025作為分界線劃定組，產(chǎn)生8個(gè)組，顯示白念珠菌的M