深部念珠菌的基因診斷、分子分型及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、第一部分天津地區(qū)深部念珠菌感染臨床株分析目的:了解天津地區(qū)深部念珠菌感染的特點(diǎn),分析深部念珠菌感染的危險(xiǎn)因素及耐藥特征,為合理使用抗生素提供依據(jù).方法:從天津地區(qū)的5家大型醫(yī)院收集2002年5月~11月的深部念珠菌感染臨床分離株,應(yīng)用WHOnet5軟件分析念珠菌臨床分離株的特點(diǎn),采用微量肉湯稀釋法測(cè)定它們對(duì)多種抗真菌藥物的敏感性.結(jié)論:念珠菌是臨床重要的條件致病菌,免疫力低下是深部念珠菌感染的重要原因,必須重視院內(nèi)深部念珠菌感染的預(yù)防和

2、監(jiān)控.氟康唑仍是早期經(jīng)驗(yàn)性治療深部念珠菌感染及預(yù)防用藥的最佳選擇.第二部分常見深部念珠菌感染的快速基因診斷、白色念珠菌基因分型及與耐藥表型的關(guān)系目的:研究常見病原念珠菌快速、準(zhǔn)確的基因診斷方法,為臨床深部念珠菌感染的分子診斷奠定基礎(chǔ).建立白色念珠菌的基因分型方法,觀察不同基因型藥敏變化,為白色念珠菌分子流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ).方法:收集常見深部念珠菌感染臨床株,應(yīng)用多重PCR技術(shù)擴(kuò)增念珠菌rDNA的內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS1-ITS2,根據(jù)P

3、CR產(chǎn)物片段的大小進(jìn)行快速基因鑒定.采用PCR方法擴(kuò)增白色念珠菌28srDNA基因內(nèi)含子區(qū),以內(nèi)含子大小及其中可轉(zhuǎn)座Ⅰ型內(nèi)含子片段的缺失或插入作為分型依據(jù).采用微量肉湯稀釋法對(duì)不同基因型白色念珠菌進(jìn)行藥敏分析.結(jié)論:此多重PCR快速基因診斷方法簡單、快速靈敏、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好,有助于臨床早期快速真菌診斷.PCR基因分型方法快速簡捷、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好,比較適合臨床白色念珠菌的分型研究.第三部分氟康唑耐藥熱帶念珠菌臨床株Fc30耐藥的分

4、子機(jī)制目的:研究耐氟康唑熱帶念珠菌臨床株Fc30對(duì)唑類抗真菌藥物的耐藥的分子機(jī)制.方法:設(shè)計(jì)引物CtERG P1,P2擴(kuò)增耐藥株Fc30和敏感株Fc17的erg11基因并測(cè)序,與氟康唑敏感標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC 750進(jìn)行DNA序列分析,研究基因點(diǎn)突變與耐藥表型的相關(guān)性.提取菌株總RNA,分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物CtERG P1,P2和CtMDR P1,P2,應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù),研究外排泵基因mdr1及靶酶基因erg11 mRNA水平與耐藥的相