溫度脅迫對(duì)漁業(yè)野生種中國(guó)小孔蛸精巢HSP70的影響.pdf

1、中國(guó)小孔蛸（Cistopus chinensis），又名嘉庚蛸（Octopus tankahkeei），隸屬軟體動(dòng)物門頭足綱蛸科，為我國(guó)東南沿海潮間帶生活的重要經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之一，其繁殖、發(fā)育與生長(zhǎng)易受潮間帶環(huán)境變化的影響。HSP70是熱休克蛋白家族中重要的一員，當(dāng)生物體受到環(huán)境變化脅迫時(shí)，細(xì)胞內(nèi) HSP70表達(dá)量增高，幫助變性蛋白恢復(fù)正常的構(gòu)象，以發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)的生物學(xué)功能。
　　為了解溫度脅迫下中國(guó)小孔蛸精巢中 HSP70的可能作用，

2、采用兼并 PCR和RACE等技術(shù)首次克隆得到該物種的HSP70基因，并進(jìn)行了氨基酸序列分析、多重序列比對(duì)及進(jìn)化樹構(gòu)建。采用 RT-PCR技術(shù)分析了HSP70 mRNA在精巢、肝胰腺、腎臟、唾液腺、鰓和肌肉6個(gè)組織中的表達(dá)情況。將中國(guó)小孔蛸置于32℃海水中熱激2h，然后再置于13℃海水中暫養(yǎng)，并在不同的暫養(yǎng)時(shí)間（0–24h）取精巢組織，采用實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)分析了不同暫養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)精巢HSP70 mRNA的表達(dá)變化情況，采用透射電鏡技術(shù)觀察

3、了高溫刺激對(duì)精巢的超微結(jié)構(gòu)損傷。此外，利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了HSP70蛋白在精巢中的分布。研究結(jié)構(gòu)及結(jié)論簡(jiǎn)要概括如下：
　　HSP70 cDNA全長(zhǎng)為2471bp，包括89bp5’非編碼區(qū)（5’-UTR），426bp3’-UTR及1956bp開放閱讀框。編碼651個(gè)氨基酸，分子量與等電點(diǎn)分別為71.8kDa和5.34。氨基酸序列分析及多重序列比對(duì)結(jié)果顯示，HSP70屬于細(xì)胞質(zhì)HSP70家族，進(jìn)化樹顯示該物種 HSP70和文蛤等其他

4、軟體動(dòng)物 HSP70具有較近的親緣關(guān)系。組織特異性表達(dá)分析表明，HSP70在精巢中表達(dá)量最高，腎臟和唾液腺次高，肝胰腺、鰓及肌肉中表達(dá)量相對(duì)較低。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSP70蛋白在精原細(xì)胞、精母細(xì)胞、精細(xì)胞及精子中均有表達(dá)。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，同對(duì)照組相比，中國(guó)小孔蛸在32℃海水中熱激2h后，精巢HSP70 mRNA表達(dá)量出現(xiàn)短暫的下降；當(dāng)轉(zhuǎn)移到13℃海水中暫養(yǎng)2h后，該基因表達(dá)量升高并達(dá)到峰值；在暫養(yǎng)4h和6h后表達(dá)量逐漸下降