Girdin及p-Girdin對乳腺癌細胞生物學功能和乳腺癌患者預后影響的初步探索.pdf

1、目的:研究Girdin及p-Girdin在不同乳腺癌細胞系中的表達情況，初步探索其對乳腺癌細胞生物學功能和乳腺癌患者預后的影響。
　　方法:首先通過蛋白免疫印跡法和聚合酶鏈式反應技術分別從蛋白和RNA水平檢測Girdin及p-Girdin在不同乳腺癌細胞系和正常乳腺上皮細胞中的表達情況，篩選出高表達Girdin的乳腺癌細胞系MDA-MB-231細胞，然后通過RNA干擾技術(shRNA)下調231細胞中Girdin的表達。對獲得的下

2、調細胞株和對照細胞株進行PAB216磷酸化蛋白芯片檢測。根據磷酸化蛋白芯片結果預測Girdin對Akt信號通路和乳腺癌細胞生物學功能的影響，并通過Western blot和一系列功能學實驗進行驗證。同時，利用乳腺癌組織芯片和免疫組織化學方法，檢測Girdin、p-Girdin(Ser1416)及p-Akt(Ser473/Thr308)在乳腺癌組織中的表達情況，通過統計學軟件SPSS分析Girdin、p-Girdin(Ser1416)、p

3、-Akt(Ser473)和p-Akt(Thr308)在組織中的相關性及它們對乳腺癌患者預后的影響。
　　結果:不論是在蛋白水平還是RNA水平，Girdin在預后較差的三陰性和HER-2過表達型乳腺癌細胞系中表達較高，而在預后較好的Luminal型細胞系尤其是LuminalA型細胞系中表達較低;p-Girdin在三陰性細胞系MDA-MB-231細胞中的表達明顯高于其他細胞。通過shRNA技術成功獲得下調Girdin表達的231下調細

4、胞株231-Girdin-sh1和空白對照細胞株231-Girdin-shControl。對比兩種細胞的磷酸化蛋白芯片結果及Western blot驗證結果，提示下調Girdin后PI3K-Akt信號通路廣泛受到抑制。利用下調細胞株和對照細胞株進行細胞克隆形成、細胞凋亡、細胞遷移、細胞周期檢測、細胞增殖實驗等，結果提示Girdin下調后影響乳腺癌細胞克隆形成，細胞早期凋亡增加，細胞遷移能力下降，細胞發(fā)生間質上皮轉化，細胞周期傾向于發(fā)生阻

5、滯，而細胞增殖未見明顯影響。
　　通過免疫組織化學染色法，觀察到Girdin及p-Girdin在乳腺癌細胞核和細胞漿中均有表達，兩者在乳腺癌組織中的陽性表達約為30％。我們還發(fā)現Girdin在乳腺癌細胞中的表達與p-Akt(Thr308)相關(P=0.049); p-Girdin在乳腺癌細胞中的表達與p-Akt(Ser473)相關(P=0.013)，與p-Akt(Thr308)有潛在的相關性(P=0.065)。Kaplan-Mei

6、er曲線提示Girdin對乳腺癌患者生存無明顯影響，而p-Girdin高表達提示乳腺痛患者預后較差。通過Cox單因素及多因素分析提示p-Girdin是影響乳腺癌患者無病生存期的一個獨立的不良預后因素。
　　結論:Girdin可促進乳腺癌細胞遷移和克隆形成，促進乳腺癌細胞發(fā)生上皮間質轉化，抑制乳腺癌早期細胞凋亡，有抑制細胞周期阻滯的傾向，不影響乳腺癌細胞增殖。磷酸化Girdin高表達提示乳腺癌患者預后較差，是一個獨立的影響無病生存期