YB-1在乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響.pdf

1、目的:1.通過(guò)對(duì)Y-盒結(jié)合蛋白1(YB-1)表達(dá)的檢測(cè),了解其在乳腺癌中的表達(dá)情況,探討其表達(dá)與乳腺癌轉(zhuǎn)移等臨床特征的關(guān)系；2.運(yùn)用YB-1shRNA重組載體轉(zhuǎn)染人類乳腺癌細(xì)胞株MCF-7,觀察乳腺癌細(xì)胞中YB-1基因表達(dá)下調(diào)后,乳腺癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲能力的變化。
　　 方法:1.采用SP法檢測(cè)50例人乳腺癌組織石蠟標(biāo)本中YB-1的表達(dá),分析YB-1核定位(活化)與臨床特征的相關(guān)性以及與細(xì)胞中雌激素受體(ER)、孕激素受體(

2、PR)以及人表皮生長(zhǎng)因子2(Her-2)之間的相關(guān)性。2.采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法將YB-1基因特異性shRNA及隨機(jī)片段HK的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染進(jìn)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中,G418抗性篩選獲得陽(yáng)性克隆,RT-PCR和Western blotting檢測(cè)MCF-7細(xì)胞中YB-1mRNA和蛋白表達(dá)量的改變；采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MCF-7細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移及侵襲能力的改變；并用RT-PCR、Western blo

3、tting及明膠酶譜法電泳分析分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MCF-7細(xì)胞中MMP-2mRNA和蛋白表達(dá)量及MMP-2蛋白活性的改變。
　　 結(jié)果:①50例人乳腺癌石蠟標(biāo)本中,YB-1在所有標(biāo)本的細(xì)胞胞漿中都有表達(dá),而僅在30例標(biāo)本中有胞核的陽(yáng)性表達(dá)。YB-1在乳腺癌中的核陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡(P=0.529)、腫瘤大小(P=0.917)、TNM分期(P=1.000)、病理分型(P=0.167)等無(wú)明顯相關(guān)性,而與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P=0

4、.001,r=0.523)；YB-1的核陽(yáng)性表達(dá)與患者的ER(P=0.004,r=0.417)、PR(P=0.002,r=-0.442)及Her-2(P=0.021,r=0.361)表達(dá)有明顯的相關(guān)性。②通過(guò)脂質(zhì)體將HK和YB-1shRNA重組載體(pGensil-1.1/HK,pGensil-1.1/YBX11,pGensil-1.1/YBX12,pGensil-1.1/YBX13)轉(zhuǎn)染進(jìn)MCF-7后,經(jīng)G418篩選2周后,獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)

5、染細(xì)胞株,依次為MCF-7/HK、MCF-7/Y1、MCF-7/Y2和MCF-7/Y3,RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后MCF-7細(xì)胞中YB-1 mRNA表達(dá)量發(fā)現(xiàn),MCF-7/Y1,MCF-7/Y2和MCF-7/Y3組細(xì)胞中YB-1mRNA表達(dá)量較MCF-7/HK和MCF-7組細(xì)胞明顯降低,并且MCF-7/Y2組細(xì)胞中YB-1mRNA表達(dá)量明顯低于MCF-7/Y1和MCF-7/Y3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),因此選用MCF-7/Y2

6、進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),并將此組細(xì)胞命名為MCF-7/YB-1,而MCF-7和MCF-7/HK組細(xì)胞分別作為空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組。Western Blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn),MCF-7/YB-1組細(xì)胞中YB-1蛋白表達(dá)量比空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組明顯降低。體外劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MCF-7/YB-1組細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力較空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組明顯降低。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,MCF-7/YB-1組細(xì)胞的遷移和侵襲能力較空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組明顯下

7、降,而兩對(duì)照組之間無(wú)明顯差異。隨后RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,MCF-7和MCF-7/HK組細(xì)胞中MMP-2mRNA的表達(dá)量無(wú)明顯差異,而MCF-7/YB-1組細(xì)胞中MMP-2mRNA的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示MCF-7/YB-1細(xì)胞中MMP-2蛋白的表達(dá)比陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組明顯降低。而明膠酶譜電泳分析結(jié)果顯示MCF-7/YB-1組細(xì)胞中MMP-2蛋白的活性

8、較對(duì)照組明顯減弱。
　　 結(jié)論:①乳腺癌中YB-1的核陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡,腫塊大小,TNM分期及病理分型無(wú)明顯相關(guān)性,而與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；YB-1的核陽(yáng)性表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),而與Her-2的表達(dá)呈正相關(guān),故YB-1的核陽(yáng)性表達(dá)提示乳腺癌患者預(yù)后不良。②轉(zhuǎn)染YB-1特異性shRNA的真核表達(dá)載體能減少乳腺癌細(xì)胞中YB-1的表達(dá),伴隨著YB-1基因沉默后,細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲能力下降,MMP-2基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白