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文檔簡介
1、目的:
1.探討HBx蛋白的穩(wěn)定表達對HL7702肝細胞增殖以及細胞中COX-2表達的影響。
2.觀察COX-2選擇性抑制劑NS-398對HL7702/HBx細胞的影響,探討COX-2在HBx蛋白促進肝細胞增殖中的作用。
方法:
HL7702/HBx細胞、HL7702/Mock細胞、HL7702細胞分別復(fù)蘇和培養(yǎng),CCK-8法和克隆形成實驗觀察和檢測上述三種細胞增殖能力;以β-actin為內(nèi)參,運
2、用RT-PCR檢測上述三種細胞中COX-2在mRNA水平的表達情況,Western blot檢測COX-2在蛋白水平的表達情況;相同濃度COX-2選擇性抑制劑NS398作用體外培養(yǎng)的各組細胞,并以DMSO組為空白對照,采用CCK-8法檢測經(jīng)處理24h、48h、72h后各組細胞的增殖活性;在50umol/L NS-398作用72h后,以DMSO作為對照組,Western blot檢測各組細胞中COX-2蛋白的表達水平。
結(jié)果:<
3、br> 細胞增殖實驗及克隆形成實驗顯示:與HL7702/Mock和HL7702兩組細胞相比較,HL7702/HBx增殖能力更強(P<0.05),克隆形成率也更高(P<0.05)。通過對各組細胞COX-2 mRNA的半定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),相對于HL7702/Mock細胞、HL7702細胞,轉(zhuǎn)染HBV X基因的HL7702細胞內(nèi)COX-2的mRNA相對表達量明顯增高(P<0.05)。Western blot檢測示:HL7702/HB
4、x細胞中的COX-2蛋白相對表達水平較高(P<0.05),而HL7702/Mock及HL7702之間則無明顯差異。NS-398能以時間依賴的方式抑制各組細胞的增殖能力,而在 HL7702/HBx細胞中增殖抑制率在3個時間點均高于其他兩組細胞(P<0.05)。經(jīng)50μmol/L NS-398處理后,各組細胞的COX-2蛋白水平顯著降低,而在HL7702/HBx細胞中更加明顯(P<0.05)。
結(jié)論:
1.HBx蛋白可促
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