小鼠真皮間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一類具有跨胚層分化潛能和高度自我復(fù)制能力的組織干細(xì)胞，具有取材方便、易分離純化、免疫原性低、能夠向腫瘤遷移等特性。MSCs最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，本世紀(jì)初有研究者從皮膚真皮組織中分離得到了MSCs，并將其命名為真皮間充質(zhì)干細(xì)胞(dermis mesenchymal stem cells，DMSCs)，DMSCs具有取材方便、來(lái)源廣泛和促進(jìn)造血恢復(fù)等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，而且DMSCs

2、具有廣泛的潛在的臨床應(yīng)用前景，不僅可以用于皮膚和神經(jīng)損傷的修復(fù)，還可應(yīng)用于抗皮膚衰老及皮膚組織工程，更利于自體移植，使其成為干細(xì)胞治療的重要的種子細(xì)胞。基于此，本實(shí)驗(yàn)旨在建立小鼠DMSCs體外快速分離、穩(wěn)定擴(kuò)增體系，并探索其多向分化潛能，為DMSCs的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　取新生2-3d的ICR(institute of cancer researcch，ICR)小鼠背部皮膚，通過(guò)機(jī)械分離和酶消化相結(jié)合的方法獲取D

3、MSCs，采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基加細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系進(jìn)行擴(kuò)增：利用免疫組織化學(xué)方法鑒定不同代數(shù)DMSCs CD44、CD29和CD45的表達(dá)，RT-PCR鑒定Sca-1、CD29、CD90、CD34、Oct4、Sox2、c-Myc、Kif4基因的表達(dá)；摸索誘導(dǎo)DMSCs向脂肪、成骨、神經(jīng)、心肌、汗腺細(xì)胞分化的方法，并采用細(xì)胞化學(xué)和RT-PCR法鑒定；將不同比例(20％、40％、60％、80％、100％)的成纖維細(xì)胞條件培養(yǎng)液作用于DMSCs，用

4、MTT法檢測(cè)作用后DMSCs的活性，進(jìn)而尋求對(duì)DMSCs增殖有促進(jìn)作用的條件培養(yǎng)液的合適濃度；取不同濃度(20nM、300nM、1μM、5μM、10μM)的Reversine作用于不同代數(shù)DMSCs，探討Reversine對(duì)DMSCs增殖和分化能力的影響。
　　結(jié)果顯示，在以往培養(yǎng)條件基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，成功獲得DMSCs體外快速分離、穩(wěn)定擴(kuò)增體系；免疫組織化學(xué)鑒定表明DMSCs強(qiáng)表達(dá)CD44，弱表達(dá)CD29，不表達(dá)CD45；RT-P