胎盤間充質干細胞的分離和培養(yǎng) 2016.07.21

1、1胎盤間充質干細胞的分離，原代與繼代培養(yǎng)及鑒定胎盤間充質干細胞的分離，原代與繼代培養(yǎng)及鑒定劉亭劉亭2016.7.212016.7.21目錄目錄前言................................................................21分離制備PMSC組織的選取...........................................32臍帶，胎盤MSC的分離與純化.........

2、...............................52.1胎盤組織的獲取，存儲與清洗...................................522臍帶，胎盤MSC的分離及純化方法..............................63原代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)...............................................1031培養(yǎng)基.......................

3、...............................1032培養(yǎng)密度....................................................1133培養(yǎng)條件....................................................1134換液........................................................1135傳代培

4、養(yǎng)...................................................1236細胞形態(tài)與生長速度..........................................1237MSC的凍存與復蘇：..........................................124細胞表面抗原檢測..............................................

5、...135生長曲線.........................................................136細胞周期.........................................................137分化潛能.........................................................13參考文獻...................

6、........................................13附件1不同實驗室從臍帶血，臍帶和胎盤等各組織中分離MSC的方法.......15臍帶血.........................................................15臍帶...........................................................15羊膜...........

7、................................................17絨毛膜.........................................................18蛻膜層.........................................................18胎盤............................................

8、...............19整體灌注法.....................................................20附件2背景知識....................................................20附件3PMSC實驗所需試劑............................................213臨床應用中受到限制。其他組織中，如動員的外周

9、血、乳牙、臍帶、臍血也存在間充質干細胞，然而，從這些組織中獲得的細胞數(shù)量較為有限。以上因素，都限制了間充質干細胞在組織工程和臨床中的運用。目前胎盤或臍帶屬于臨床廢棄物，容易獲得，并且無污染，取材研究和應用基本無倫理學爭議，研究表明胎盤或臍帶含有豐富的MSC。有研究表明PMSC比骨髓間充質干細胞更容易分離培養(yǎng)，細胞活性更好，還可誘導分化成脂肪，成骨等多種細胞。并且這些胎盤源的間充質干細胞（胎盤源的間充質干細胞（placentaderive

10、dmesenchymalstemcells，PMSCs）具有極低的免疫原性，大多數(shù)患者對于胎盤或臍帶間充質干細胞具有天然的免疫耐受，因此，人胎盤間充質干細胞在研究相關疾病的動物模型中，即便是人動物模型間的異種間移植，由于存在天然的免疫耐受，對實驗研究的結果影響甚小，這對于很多疾病研究的模型建立具有很好的作用。目前MSC主要臨床應用于抑制移植物抗宿主反應。動物模型研究結果表明PMSC對子宮內膜損傷（劉芳，2013），大鼠肝組織損傷（宮黎明

11、等，2011），APP轉基因鼠阿爾茨海默病（郭亞男等，2009）均有療效，也可以用于構建組織工程皮膚（徐彪等，2013）。所以，綜合充分利用胎盤和臍帶作為間充質干細綜合充分利用胎盤和臍帶作為間充質干細胞新來源，優(yōu)化分離純化以及傳代培養(yǎng)條件，加快細胞繁殖速度，降低培養(yǎng)成胞新來源，優(yōu)化分離純化以及傳代培養(yǎng)條件，加快細胞繁殖速度，降低培養(yǎng)成本以高效率獲取大量的本以高效率獲取大量的PMSC對于的各種疾病實驗研究及醫(yī)院各個科室的臨床對于的各種疾病

12、實驗研究及醫(yī)院各個科室的臨床應用，都具有重要意義。應用，都具有重要意義。1分離制備分離制備PMSC組織的選取組織的選取胎盤起源于胚胎發(fā)育期胚外中胚層，人足月娩出的胎盤由羊膜層、絨毛膜層和蛻膜層組成。從臍帶血臍帶血（于海微等，2009；管英華等，2011），臍帶臍帶（徐燕等，2009；韓之波等，2012；管英華等，2011；李艷琪等，2014；趙琳等，2016），整個胎盤整個胎盤（陸琰等，2009；沙文瓊等，2010；劉洋等，2015；賴