TNFSF15抑制小鼠顱內血管母細胞瘤的生長及出血.pdf

1、目的:手術切除是治療人的顱內血管母細胞瘤的最佳方式，但是生長在關鍵部位（例如顱底或者腦干）及顱內多發(fā)的血管母細胞瘤阻礙的手術的實施，并且當前沒有一種有效的藥物治療方式。通過一種有效的化學藥物，來抑制血管母細胞瘤的異常過多增生的血管，也許能能夠成為一種有效的治療方式。
　　方法:通過免疫組織化學染色來檢測人的血管母細胞瘤的VEGF/TNFSF15及小膠質/巨噬細胞的表達。利用bEnd.3細胞立體定向注射到小鼠的基底節(jié)，建立小鼠的血管

2、母細胞瘤模型。通過HE染色來評價血管瘤及出血的體積，ELISA檢測VEGF/TNFSF15的表達水平，CD68+，7/4+等免疫熒光染色分析炎性細胞對血管瘤的浸潤情況。通過慢病毒轉染bEnd.3細胞，致使該細胞高表達TNFSF15，通過RT-PCR，Western blotting及ELISA，分析VEGF/TNFSF15的表達水平。細胞增殖實驗和管腔形成實驗來評價bEnd.3細胞的體外血管新生能力。
　　結果:腫瘤壞死因子超家族

3、成員-15（TNFSF15，又名血管內皮生長抑制因子）被認為是一種抗血管新生的因子，TNFSF15能夠抑制血管內皮細胞的生長，誘導分裂期血管內皮細胞的凋亡，抑制血管內皮祖細胞向血管內皮細胞的轉化。通過免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)，TNFSF15在正常人的微血管結構中高度表達，但是在人的血管母細胞瘤內極低的表達，上調血管母細胞瘤的TNFSF15也許能成為治療該病的有效靶點。來源于小鼠內皮瘤的bEnd.3細胞系能夠分泌大量的血管內皮生長因子(VEG

4、F)，VEGF不但能夠促進血管的生長也能促進血管的滲漏，但是b.End3細胞表達極少量的TNFSF15，研究發(fā)現(xiàn)bEnd.3細胞能在小鼠的皮下組織形成穩(wěn)定的血管瘤。我們把b.End3細胞移植到C57BL/6小鼠的顱內，能形成與人的血管母細胞瘤病理結構極其相似的小鼠的顱內細胞瘤。與對照組相比，當把bEnd.3細胞移植到高TNFSF15表達的轉基因小鼠顱內，能夠形成較小體積的血管瘤和能減少血管瘤的出血，并且伴有較少的炎性細胞浸潤和增多的周細

5、胞募集。更重要的是，在TNFSF15高表達的轉基因小鼠中，能夠下調血管瘤中VEGF的表達水平。通過慢病毒轉染bEnd.3細胞，促使bEnd.3細胞高表達TNFSF15，亦能發(fā)現(xiàn)抑制血管瘤的生長和出血，并也能下調VEGF的表達。體外研究亦證實TNFSF15能夠抑制bEnd.3細胞的生長和下調VEGF的分泌。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，通過使用死亡受體-3（DR-3）的拮抗劑來封閉DR-3的功能，發(fā)現(xiàn)TNFSF15不能發(fā)揮抑制bEnd.3細胞增殖和不

6、能下調VEGF的表達，為此我們推論TNSF15能夠通過DR3受體下調VEGF的表達水平，進而抑制血管瘤的生長及出血的發(fā)生。
　　結論:與正常的腦的微血管相比，我們發(fā)現(xiàn)在人的血管母細胞瘤標本中，存在高VEGF表達和極低TNFSF15表達的模式，這種異常的表達模式可能誘導了或者加重了血管母細胞瘤疾病的發(fā)生發(fā)展。在小鼠的顱內血管瘤的模型中，TNFSF15能夠抑制血管瘤的生長和減少出血的發(fā)生，抑制血管瘤周圍炎性細胞的浸潤和促進周細胞的募集