腦紅蛋白對小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞系生長速度的影響.pdf

1、背景與目的：
　　腦紅蛋白（neuroglobin，Ngb）過去被認為在神經(jīng)元細胞的特異性表達，然而現(xiàn)在在多種腫瘤細胞中也被發(fā)現(xiàn)存在表達。這說明Ngb除了參與低氧調(diào)節(jié)和保護神經(jīng)元及腦組織免于缺血缺氧性損傷外，可能在腫瘤的發(fā)生、形成和代謝中也發(fā)揮了作用。迄今為止，揭露Ngb和腫瘤發(fā)生之間直接聯(lián)系的文章很少。然而，另兩個球蛋白家族的成員，肌紅蛋白（myoglobin，Mb）和細胞紅蛋白（cytoglobin，Cygb）已被多次報道參與

2、了腫瘤的形成。其可能機制包括清除氧氮自由基，通過調(diào)節(jié)低氧誘導因子（hypoxia inducible factor-1，HIF-1）表達，參與低氧環(huán)境下的適應，以及增加線粒體膜的穩(wěn)定性。這些過程說明球蛋白家族或多或少通過和細胞色素c之間的某種聯(lián)系，參與干擾細胞凋亡途徑。
　　之前有研究通過人類免疫缺陷病毒1型反式激活因子（transactivator of transcription，TAT）蛋白轉(zhuǎn)導技術，使大分子Ngb蛋白成功穿

3、過血腦屏障（blood-brain barrier，BBB）進入腦內(nèi)，解決了Ngb進入腦內(nèi)細胞發(fā)揮腦保護作用的瓶頸問題，使臨床應用成為可能。因此，實現(xiàn)臨床應用之前，去探索Ngb對腦腫瘤發(fā)生、發(fā)展的潛在影響具有重要意義。
　　本研究擬通過探討Ngb是否在腦腫瘤細胞系中存在表達，并結(jié)合慢病毒載體介導，上調(diào)小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞系N2a內(nèi)Ngb的表達，來研究Ngb過表達狀態(tài)下細胞的生長和增殖情況，為將來深入其機制的研究奠定基礎，為Ngb在

4、腦血管病的神經(jīng)保護治療中的應用提供保障。
　　方法：
　　1.通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR）、細胞免疫熒光、estern Blot的方法，檢查Ngb在小鼠神經(jīng)母細胞瘤細胞系（N2a）、人類星形膠質(zhì)細胞瘤細胞系（U251）、大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞系（C6）中的表達情況。
　　2.將包裝好的Ngb過表達慢病毒導入N2a細胞，上

5、調(diào)其表達。表達產(chǎn)物通過Western Blot鑒定，并進行進一步實驗去觀察處理組和對照組之間細胞的增殖情況，包括細胞活力檢測和克隆形成試驗。
　　結(jié)果
　　1.通過RT-PCR、免疫熒光檢查和Western Blot，表明Ngb在神經(jīng)母細胞瘤細胞系（N2a）與腦膠質(zhì)瘤細胞系（U251、C6）均有表達。
　　2.感染Lenti-Ngb-GFP組的Ngb表達較對照組和Lenti-GFP組顯著升高。
　　3. Lent

6、i-Ngb-GFP感染組從第六天起細胞增值速度明顯快于其他組（P<0.01）。在相同環(huán)境培養(yǎng)14天后，慢病毒感染組和對照組在克隆數(shù)量上未見差異。然而Lenti-Ngb-GFP組形成的細胞克隆平均大于Lenti-GFP組和對照組（P<0.05）。
　　結(jié)論
　　1.通過RT-PCR、細胞免疫熒光的方法證實Ngb在多種腦腫瘤細胞系中存在表達。
　　2.通過使用Lenti-Ngb-GFP感染N2a細胞，成功上調(diào)了N2a細胞內(nèi)