鯉魚肌肉金屬蛋白酶的分離純化與性質(zhì)分析.pdf

1、本文以淡水鯉魚為研究對象，分析肌肉中金屬蛋白酶的存在情況、酶學(xué)性質(zhì)，實現(xiàn)了金屬蛋白酶的高度純化并對其性質(zhì)進(jìn)行深入的分析，為MMPs在魚類肌肉中的生理學(xué)功能的進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù)，為研究魚死后肌肉軟化機(jī)理提供理論依據(jù)，填補(bǔ)了國內(nèi)在淡水魚肌肉基質(zhì)金屬蛋白酶研究領(lǐng)域的空白。 利用明膠酶譜對鯉魚肌肉中的基質(zhì)金屬蛋白酶進(jìn)行研究，在60 kDa 到97 kDa之間，發(fā)現(xiàn)鯉魚肌肉中分別存在兩種降解明膠的酶，且紅色肉中的酶活性遠(yuǎn)高于白色肉。

2、用基質(zhì)金屬蛋白酶激活劑APMA處理后，產(chǎn)生了其它的活性形式，說明這些活性是基質(zhì)金屬蛋白酶的酶原和活性形式。金屬離子螯合劑EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline能有效抑制其活性，而其他抑制劑沒有明顯抑制作用，因此，這些酶是金屬蛋白酶。采用硫酸銨分級鹽析、DEAE-Sephacel離子交換層析、Sephacryl S-200凝膠過濾層析、Econo-Pac Macro-Prep HighQ離子交換層析和Gelatin S

3、epharoseTM 4B親和層析等方法，從鯉魚紅色肌肉中分離純化得到三種MMPs。它們的分子量分別為75 kDa、67 kDa和64 kDa。三者的最適反應(yīng)溫度約為40 ℃，最適pH為8.0。金屬螯合劑EDTA，EGTA和1,10-phenanthroline能有效抑制其活性，而其他抑制劑沒有明顯抑制作用，Ca2+能夠促進(jìn)這些酶的活性，此外，這些酶可以高效降解膠原蛋白，但不能降解肌原纖維蛋白。同時，我們還發(fā)現(xiàn)鯉魚肌肉中存在肌原纖維結(jié)合

4、型金屬蛋白酶，這為研究肌原纖維蛋白的降解提供了新途徑，有助于研究肌原纖維蛋白的降解。通過一年間季節(jié)變化的實驗發(fā)現(xiàn)，鯉魚紅色肉肌球蛋白重鏈的自身降解比白色肉明顯。 金屬蛋白酶抑制劑EDTA和EGTA能夠有效抑制肌球蛋白的降解，金屬離子Cu2+和Mn2+對肌原纖維的降解有很強(qiáng)的促進(jìn)作用，而Zn2+和Ge2+對肌原纖維降解有一定的抑制作用。因此，金屬蛋白酶對肌原纖維蛋白的降解起主要作用，即鯉魚肌肉中存在肌原纖維結(jié)合型金屬蛋白酶。同時，